حسینعلی ساسان - گروه زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه شهید با هنر کرمان، کرمان، ایران
مهین رسانی - دانشجوی کارشناسی ارشد، بخش مهندسی علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید با هنر کرمان،
سمانه کارآموز - دانشجوی کارشناسی ارشد، بخش مهندسی علوم دامی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید با هنر کرمان،
علی اسماعیلی زاده کشکوئیه - دانشگاه شهید باهنر کرمان

اهداف: هدف از انجام این پژوهش، تکثیر و همسانه­سازی شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی ژن کشنده آلفا­­توکسین (α-Toxin) باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس با اندازه­های به ترتیب 1100 و 750 جفت باز با استفاده از ناقل بیانی pET28a در باکتری E.coli بود. مواد و روش­ها: استخراجDNA  ژنومی با استفاده از کیت کیاژن صورت گرفت. آغازگرهای جلوبرنده و برگشت در آزمایشگاه طراحی و در ناحیه ابتدایی آغازگرها ردیف­های آنزیم­های برشگر HindIII و XhoI مطابق با ناحیه کلونینگ پلاسمید مورد نظر اضافه گردید. قطعات ژنی مورد نظر با روش PCR معمولی تکثیر و در ناقل pET28a با کمک روش شوک حرارتی کلون شدند. استخراج DNA پلاسمیدی با استفاده از روش لیز قلیایی صورت گرفت. نتایج: نتایج ژل الکتروفورز محصولات PCR، تکثیر واضح و واحد شکل کامل و همچنین بخش ابتدایی قطعات ژنی مورد نظر را مطابق با اندازه های مورد انتظار نشان داد. بعلاوه با استفاده از آزمایش هضم آنزیمی منفرد و دوگانه توسط آنزیم های برشگر HindIII و XhoI همسانه سازی ژنهای آلفا­توکسین در باکتری میزبان و تولید باکتریهای نوترکیب تایید شد. نتیجه­گیری:  با توجه به موفقیت آمیز بودن دقیق کلونینگ ژنهای آلفا­توکسین در باکتری­های بیانی میزبان، می­توان گفت که پرایمرهای طراحی شده در این تحقیق برای تکثیر ژن آلفا­توکسین بسیار اختصاصی بوده و به عنوان مارکر شناسایی و طبقه بندی این باکتری­ها می­توانند استفاده واقع شوند. همچنین با ساخت احتمالی واکسن­های نوترکیب ژنتیکی مهندسی­شده می­توان کنترل و مقابله با پاتوژن­های مهمی همچون باکتری کلستریدیوم پرفرینجنس را امکان­پذیر ساخت.

آلفاتوکسین, کلستریدیوم پرفرینجنس, همسانه سازی