حسین معصومی - کرمان کرمان، دانشگاه شهید باهنر، دانشکده کشاورزی، بخش گیاهپزشکی
پریسا حسن شیخی - گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان
جعفر ذوالعلی - استاد
اکبر حسینی پور - گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه شهید باهنر کرمان

اهداف: ویروس X سیب زمینی (PVX) از خانواده Alphaflexiviridaeو جنس Potexvirus یکی از رایج­ترین و گسترده­ترین ویروس­های آلوده­کننده سیب زمینی در جهان می­باشد. به­دلیل گسترش و خسارت اقتصادی این ویروس در ایران، شناسایی و ردیابی آن با استفاده از روش­های با صرفه­تر ضروری می­باشد. تولید آنتی­بادی چندهمسانه­ای با استفاده از فناوری دی ان ای نوترکیب، یک راهکار مفید برای تسهیل شناسایی این ویروس در طبیعت می­باشد. مواد و روش­ها: بر­این اساس، در بررسی حاضر، یک نمونه سیب زمینی آلوده به PVX از مزارع سیب زمینی در زرند، استان کرمان جمع آوری و آلودگی آن نسبت به ویروس مذکورتوسط آزمون DAS-ELISA تایید گردید. جدایه مذکور جهت تکثیر، بر روی توتون (Nicotiana glutinosa) مایه زنی گردید. پس از استخراج آر ان ای از گیاه آزمون، با استفاده از واکنش RT-PCR و آغازگرهای اختصاصی حاوی جایگاه برش برای آنزیم­های برشی، توالی پروتئین پوششی  ویروس تکثیر و در ناقل بیان پروکاریوتی (pQE60) همسانه­سازی گردید. پلاسمید نوترکیب، به باکتری Escherichia coli سویه M15، منتقل شد. نتایج: پس از القای بیان، پروتئین مورد نظر استخراج و با تکنیک SDS-PAGE در ژل پلی آکریلامید 5/12 % مورد بررسی قرار گرفت. نتایج حاصل بیانگر آن است که وزن مولکولی باند حاصله در آزمون SDS-PAGE با وزن مولکولی پروتئین پوششی (kDa 24) مطابقت دارد. همچنین بیان پروتئین پوششی ویروس در تکنیک دات بلات نیز تایید گردید. نتیجه گیری نهایی: در این تحقیق، یک آنتی­ژن نوترکیب مناسب جهت تشخیص ویروس X سیب زمینی تهیه گردید که به­خوبی توسط آنتی­سرم تولید شده از طریق تزریق پیکره­های کامل ویروس به خرگوش در آزمون دات بلات شناسایی شد. تولید آنتی­بادی چندهمسانه­ای با استفاده از آنتی­ژن ویروسی نوترکیب، گامی موثر در زمینه تسریع و تسهیل فرآیند شناسایی سرولوژیکی نمونه­های آلوده به این ویروس مهم خواهد بود.

باکتری E. coli, بیان پروتئین نوترکیب, پروتئین پوششی ویروس, ویروس X سیب زمینی