یحیی تهمتن
محمدمهدی نام آوری
علی پوربخش
معصومه حیاتی
امیدرضا امرآبادی
محمدحسین حسینی
صفر صادق زاده
پژواک خاکی

در بین عوامل متعدد، باکتری اشریشیاکلی دارای اهمیت قابل توجهی در ایجاد اسهال می باشد. . اگر چه سویه های خاصی از اشریشیاکلی با ایجاد اسهال مرتبط می باشند، اما سویه های انتروتوکسیژنیک اشریشیاکلی ‭(ETEC ) ‬باکتری غالب ایجاد کننده ی اسهال در گوساله ها است. این سویه با داشتن دو فاکتور کلنیزاسیون و انتروتوکسین مقاوم و حساس به حرارت باعث اسهال آبکی می شود. هدف از مطالعه حاضر تهیه آنتی ژن های پیکره کامل باکتری ‭E.coli K‬‮‭99‬، انتی ژن خالص K‮‭99‬، توکسین و همچنین مخلوط پیکره و آنتی ژن خالص و سپس ارزیابی ایمنی زایی آنها در رت و گوسفند می باشد. پس از کشت باکتری در محیط مینکا و غیر فعال سازی با ‭PBS ‬شستشو داده شد و پیکره کامل تهیه گردید. آنتی ژن خالص K‮‭99‬ نیز پس از تهیه این آنتی ژن با روش حرارت و سپس استفاده از ستون کروماتوگرافی تبادل یونی، آنتی ژن خالص بدست آمد. محلول رویی کشت باکتری در محیط حاوی کازامینو اسید و بردن بر روی ژل اکریل آمید و برش باندهای مربوط به توکسین از روی ژل نیز برای خالص سازی ناقص توکسین بکار رفت. از مخلوط پیکره کامل و آنتی ژن خالص K‮‭99‬ هم به همین منظور استفاده گردید. پس از تزریق هر کدام از این محلول ها به رت و گوسفند و خونگیری از آنها بوسیله تست الیزا میزان ایمنی زایی آنها ارزیابی شد. نتایج تیتر سرمی تزریق به رت اخلاف معنی داری بین گروه توکسین دریافت کرده و سایر گروهها بدست داد. همین نتایج در مورد گوسفند نیز صادق بود. بدین صورت که بین گروههای مختلف آنتی ژن خالص فیمبری K‮‭99‬، پیکره کامل باکتری و مخلوط پیکره و آنتی ژن K‮‭99‬ اختلاف آماری معنی داری بدست نیامد اما این گروه ها با گروه دریافت توکسین اخلاف آماری معنی داری داشت.آنتی ژن K‮‭99‬ نقش اساسی در بیماری زایی گوساله ها دارد زیرا به عنوان فاکتور غالب در باکتری انتروتوکسیژن گاو است لذا این آنتی ژن در ارزیابی ایمنی نیز حایز اهمیت است. این آنتی ژن باعث چسبیدن باکتری به مخاط روده می شود. بنابر این محلول غیر فعال شده حاوی این آنتی ژن می تواند مانع چسبیدن باکتری و جلوگیری از تکثیر غیر طبیعی آن شود. در مطالعه حاضر استفاده از آنتی ژن کامل پیکره باکتری با توجه به در دسترس بودن و هزینه تهیه، بهترین نتیجه را در ایمنی زایی بدست داد. واژگان کلیدی: ایمنی زایی، آنتی ژن K‮‭99‬، توکسین، پیکره کامل باکتری اشریشیاکلی K‮‭99‬