همسانه سازی و بیان هترولوگ لاکاز در Pichia pastoris و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی لاکاز نوترکیب
عنوان مقاله: همسانه سازی و بیان هترولوگ لاکاز در Pichia pastoris و تعیین خصوصیات بیوشیمیایی لاکاز نوترکیب
شناسه ملی مقاله: JR_GEB-8-2_001
منتشر شده در در سال 1398
شناسه ملی مقاله: JR_GEB-8-2_001
منتشر شده در در سال 1398
مشخصات نویسندگان مقاله:
الهام سلیمانی - پژوهشکده ژنتیک و زیستفناوری کشاورزی طبرستان، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری
قربانعلی نعمت زاده - پژوهشکده ژنتیک و زیستفناوری کشاورزی طبرستان، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری
روحا کسری کرمانشاهی - دانشگاه الزهرا (س)
سوسانا رودریگز کوتو - سازمان ایکرباسک اسپانیا
خلاصه مقاله:
الهام سلیمانی - پژوهشکده ژنتیک و زیستفناوری کشاورزی طبرستان، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری
قربانعلی نعمت زاده - پژوهشکده ژنتیک و زیستفناوری کشاورزی طبرستان، دانشگاه علوم کشاورزی و منابع طبیعی ساری
روحا کسری کرمانشاهی - دانشگاه الزهرا (س)
سوسانا رودریگز کوتو - سازمان ایکرباسک اسپانیا
لاکازها آنزیمهایی حاوی مس میباشند که اکسیداسیون ترکیبات آروماتیک و غیرآروماتیک را از طریق احیای مولکول اکسیژن به آب کاتالیز میکنند . همچنین به دلیل قابلیت اکسیداسیون طیف وسیعی از ترکیبات فنلی کاربرد وسیعی در صنعت دارند. در این مطالعه توالی نوکلئوتیدی ژن لاکاز بر اساس ترجیح کدونی میزبان مخمری Pichia pastoris GS115 بهینه شد، سپس توسط شرکت اینویتروژن سنتز و در حامل بیانی pPICZ alpha A همسانه سازی شد و تحت پیشبر AOX1 به مخمر پیکیا پاستوریس به روش الکتروپوریشن منتقل شد. به منظور تعیین شرایط بهینه بیش بیان آنزیم، در سطوح مختلفی از دما، غلظت مس و متانول القای بیان صورت گرفت و فعالیت آنزیم در هریک از سطوح ارزیابی شد. بیش بیان آنزیم در غلظت 4/0 میلی مولار مس و 8/0 درصد متانول و دمای 25 درجه سانتیگراد به دست آمد. بیش بیان ترشحی لاکاز در شرایط بهینه U/L 9600 به دستآمد. پس از بررسی کیفی و کمی آنزیم برخی خصوصیات بیوشیمیایی آنزیم تعیین شد. دما و pH بهینه لاکاز نوترکیب به ترتیب40 درجه سانتیگراد و 3 تعیین شد. بررسی پایداری دمایی و pH لاکاز نشان داد که این آنزیم پایداری بالایی در برابر حرارت داشته و قادر به فعالیت در طیف وسیعی از pH میباشد. بررسی خصوصیات کینتیکی آنزیم با استفاده از سوبسترای ABTS، mM ۰۸۹/۰ Km= تعیین شد. نتایج این تحقیق نشان داد که مخمر پیکیا پاستوریس میتواند کاندیدای مناسبی برای بیان لاکاز نوترکیب به منظور استفاده در صنایع متعدد جهت پاکسازی پساب، بیوسنسور و سایر کاربردها باشد.
کلمات کلیدی: laccase, Pichia pastoris, heterologous expression, bioremediation, cloning, لاکاز, پیکیا پاستوریس, بیان هترولوگ, زیستپالایی, همسانه سازی
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1145192/