تکثیر و همسانه سازی ژن سه قسمتی lsc در وکتور pcDNA۳.۱ و بررسی بیان آن در لاین سلولی
عنوان مقاله: تکثیر و همسانه سازی ژن سه قسمتی lsc در وکتور pcDNA۳.۱ و بررسی بیان آن در لاین سلولی
شناسه ملی مقاله: JR_NCMBJ-11-42_006
منتشر شده در در سال 1399
شناسه ملی مقاله: JR_NCMBJ-11-42_006
منتشر شده در در سال 1399
مشخصات نویسندگان مقاله:
سپیده ساروقی - Department of Genetics, Payam Noor University, Tehran, Iran
مریم زارع - Department of Biology, Payam Noor University , Tehran, Iran.
روح الله کاظمی - Green Gene Company, Tehran, Iran
جواد معتمدی - Green Gene Company, Tehran, Iran
جعفر امانی - Chemical Injuries Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
خلاصه مقاله:
سپیده ساروقی - Department of Genetics, Payam Noor University, Tehran, Iran
مریم زارع - Department of Biology, Payam Noor University , Tehran, Iran.
روح الله کاظمی - Green Gene Company, Tehran, Iran
جواد معتمدی - Green Gene Company, Tehran, Iran
جعفر امانی - Chemical Injuries Research Center, Baqiyatallah University of Medical Sciences, Tehran, Iran
سابقه و هدف: اسهال دومین عامل رایج مرگ و میر کودکان زیر ۵ سال است. مهمترین سویههای بیماریزایی اشریشیاکلی انتروتوکسیژنیک با تولید سم Lt و St موجب بیماری اسهال مسافران و اشریشیاکلی انتروهموراژیک با ترشح سم شبه شیگا موجب اسهال خونی میشود. زیرواحد B انتروتوکسین کلره در باکتری ویبریوکلرا در ایجاد بیماری اسهال نقش بهسزایی دارد.بهاحتمال با ترکیب اپی-توپهای CtxB، LtB و StB (LSC) و تولید واکسن تری والان میتوان آنتیبادی اختصاصی تری برای مقابله با این سموم ایجاد کرد. هدف از این تحقیق تکثیر ژن کایمر lsc جهت کلونینگ در وکتور pcDNA۳.۱(+) بهمنظور طراحی DNA واکسن و بررسی بیان در وکتور یوکاریوتیک است.
مواد و روش ها: توالی ژن lsc پس از طراحی پرایمر و تکثیر بهوسیله PCR به وکتورpcDNA۳.۱(+) منتقل شد. وکتور pcDNA۳.۱(+) و محصول PCR با استفاده از آنزیم HindIII و EcoRI مورد هضم قرار گرفت. کلونینگ ژن lsc در وکتورpcDNA۳.۱(+) و PCR انجام شد. کلونها مورد هضم آنزیمی قرار گرفتند. جهت اطمینان از بیان ژن lsc به سلول HEK-۲۹۳T منتقل و با استفاده از روش وسترن بلاتینگ مورد تایید قرار گرفت.
یافته ها: ژن lsc پس از PCR و کلونینگ در وکتورpcDNA۳.۱(+) با استفاده از هضم آنزیمی مورد تایید قرار گرفت و قطعهای بهطول bp۹۳۳ رویت و تایید شد. سپس با استفاده از کیت توربوفکت به سلول HEK-۲۹۳T منتقل و بیان پروتئین نوترکیب به روش وسترن بلاتینگ مورد تایید قرار گرفت و پروتئین به وزن ۳۹ کیلودالتون تایید شد.
نتیجه گیری: نتایج بهدست آمده از ژن کایمر بهخوبی در لاین سلولی بیان و توسط وسترن بلاتینگ تایید شد که میتواند کاندید مناسبی برای مقابله با عفونت باکتریایی باشد.
کلمات کلیدی: Cloning, lsc gene, DNA vaccine, IAU science, همسانه سازی, ژن lsc, DNA واکسن, IAU science
صفحه اختصاصی مقاله و دریافت فایل کامل: https://civilica.com/doc/1240735/