رمیسا شعربافی
فاطمه مرادیان
علیرضا رفیعی
علی برزگر

سابقه و هدف: لاکتوفرین یک پروتئین چند عملکردی با خواص مفید زیادی است که کاندید مناسبی جهت کاربردهای بالینی و تجاری است. اخیرا مشخص شده که تغذیه خوراکی لاکتوفرین اثرات مفیدی از جمله تعدیل عملکرد سیستم ایمنی، فعالیت ضد میکروبی و آنتی اکسیدانی در سلامت نوزادان و بزرگسالان در انسان و حیوانات داشته است. به طوری که امروزه لاکتوفرین به عنوان مکمل غذایی انسان و حیوانات به کار می رود. این مطالعه با هدف جداسازی و خالص سازی بهینه لاکتوفرین از شیر گاو انجام گردید.مواد و روش ها: کلستروم شیر گاو در فاصله حداکثر ۷۲ ساعت بعد از زایش اخذ گردید. ابتدا چربی شیر جدا شد برای جداسازی لاکتوفرین از سایر پروتیئن های شیر، جداسازی در دو مرحله انجام گردید. ابتدا کازئین شیر با رسوب دهی با آمونیوم سولفات جدا گردید و در مرحله بعد لاکتوفرین با استفاده از ستون کروماتوگرافی تبادل کاتیونی CM-Sephadex-C۵۰ با FPLC جداسازی شد. برای شناسایی پروتیئن بدست آمده از روش SDS-PAGE استفاده شد.یافته ها: پروتئین فعال لاکتوفرین خالص با وزن مولکولی ۸۰ KDa با غلظت ۲.۴ mg/ml بدست آمد. مرتبه خالص سازی توسط ستون کروماتوگرافی تبادل کاتیونی نسبت به مرحله اول خالص سازی، رسوب دهی با نمک آمونیوم سولفات ۴ مرتبه بوده است و بازده خالص سازی ۹۰ بود.استنتاج: با توجه به اهمیت روزافزون کاربردهای درمانی، تغذیه ای و اثرات تنظیم کنندگی سیستم ایمنی مربوط به لاکتوفرین، یافتن روش خالص سازی مناسب با بازده بالا اهمیت فراوانی دارد. یافته های این تحقیق نشان داد که روش فوق علاوه بر سادگی و سرعت می تواند باعث استحصال لاکتوفرین با خلوص بالا گردد.

Lactoferrin, isolation, purification, cation exchange chromatography, لاکتوفرین، جداسازی، خالص سازی، کروماتوگرافی تبادل کاتیونی