فتح الله احمدپور - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
باقر یخچالی - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
سیدصفاعلی فاطمی - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری
علی اصغر کارخانه - پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری

لیپازها (تری آسیل گلیسرول آسیل هیدرولازها EC 3.1.1.3) هیدرولیز تری آسیل گلیسرول به اسیدهای چرب و گلیسرول را در حد فاصل لایه چربی و آب کاتالیز می کند. این آنزیم ها کاربردهای فراوانی در صنایع غذایی، کشاورزی، روغن، چوب و کاغذ، پزشکی و دارویی دارند. در این تحقیق قابلیت ترجمه پذیری کدون های ژن لیپاز باکتریایی باسیلوس پامیلوس (Bacillus pumilus) بومی در میزبان پیکیا پاستوریس بررسی شد. ژن لیپاز با کدون های بهینه مخمری به صورت مصنوعی ساخته و در حامل بیانی تحت کنترل دو پروموتر الکل اکسیداز و گلیسرآلدهیدفسفات دهیدروژناز کلون شد. سازه حاصل پس از تأئید کلونینک با روش های مولکولی و آنزیمی با روش الکتروپوریشن به درون مخمر بیانی پیکیا پاستوریس (Pichia pastoris) انتقال داده شد. بیان آنزیم لیپاز در محیط کشت مناسب با تست پارانیتروفنیل پالمیتات (pNPP) و روش SDS-PAGE بررسی شد. نتایج نشان دهنده بیان لیپاز نوترکیب در حد بیان ژن طبیعی بود. مشابهت بیان زن لیپاز با کدونهای باسیلوسی و مخمری مؤید نقش مهمتر ساختار پروتئین نسبت به ترجیح کدونی در بیان برخی پروتئینها مانند لیپاز است.

لیپاز، باسیلوس پامیلوس، پیکیا پاستوریس، ترجمه پذیری کدون، بیان