سکینه رضازاده - دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان
محمدمهدی سوهانی - استادیار گروه بیوتکنولوژی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان
محمدحسین رضادوست - مربی بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشکده علوم کشاورزی، دانشگاه گیلان

درخت نارنج در اکثر مناطق مرکبات خیز دنیا به دلیل ویژگی های خوب زراعی به خصوص عملکرد میوه، کیفیت، سادگی و مقاومت به پاتوژن های مختلف و تنش های غیرزیستی سالهاست به عنوان پایه مادری مورد استفاده قرار می گیرد. امروزه استفاده از ترانسفورماسیون مرکبات ابزار با اهمیت در اصلاح این گیاهان تلقی می شود. تأیید اولیه گیاهان ترانس ژنیک با بررسی مقاومت گیاهچه ها به آنتی بیوتیک و علفکش انجام می شود. باکتری مورد استفاده در ترانسفورماسیون Agrobacterium tumefaciens نژاد EHA 105 بوده است که حامل وکتور خاموشی pFGC5941 وژن کدکننده پوشش پروتئینی ویروس تریستیزای مرکبات(CTV)و دارای ژن های انتخابی مقاومت به کانامایسین درخارج از ناحیه T-DNA و مقاومت به علف کش بستا درناحیه T-DNA بوده ا ست. ریز نمونه ها جهت تولید شاخساره ی تراریخته، اپی کوتیل وهیپوکوتیل گیاهان نارنج بوده است که به مدت 4 هفته درتاریکی و10روزدر روشنایی رشد کرده بودند. تراریزش از طریق همکشتی ریزنمونه هابه مدت 3روز با Agrobacterium tumefaciensانجام شد.پس از تراریزش، ریزنمونه ها به محیط کشت انتخابی حاوی علفکش بستا با ترکیبی از تنظیم کننده های رشد 2 میلی گرم در لیتر BAP و25/0 میلی گرم در لیتر NAA منتقل شدند. برای تأیید ترانسفورماسیون شاخساره های رشد یافته در محیط حاوی علفکش بستا ، DNA از شاخساره ها استخراج و واکنش PCR با آغازگرهای مربوط به CTV ,علفکش بستا و کانامایسین انجام گردید و نتایج روی ژل آگارز1% مشاهده شد.تحلیل نتایج نشان دادکه ازآنالیز 6 شاخساره های رشد یافته در محیط حاوی علفکش شده سه شاخساره ترانسفورم بودند.

تراریزش، کشت بافت ، مقاومت به CTV