علی رضا سعیدی نیا - دانشجوی دکتری ژنتیک مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
مجید صادقی زاده - مربی گروه ژنتیک، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران
مسعود سلیمانی - دانشیار گروه هماتولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
مهدی زین الدینی - استادیار گروه ژنتیک، پژوهشکده فناوری زیستی، دانشگاه مالک اشتر، تهران، ایران

هدف از این مطالعه، بکارگیری تکنیک حذف ژنی در باکتری بروسلا ملی تنسیس Revl بمنظور دستیابی به یک سویه تضعیف شده، می باشد. لذا ژن کدکننده آنزیم پروزامین سنتتاز (per) که یکی از ژن های درگیر در تشکیل ساختار زنجیره o از LPS می باشد، از طریق انجام نوترکیبی همساخت، حذف گردد. نوترکیبی همساخت با استفاده از وکتور خودکشی حامل کاست حذف که شامل ترادف کدکننده مقاومت به کانامایسین (kan) بهمراه ترادف های بالا دست و پایین دست ژن per در طرفین آن بود، صورت گرفت. کاست حذف با انجام واکنشهای PCR سه مرحله ای با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ساخته شد و بمنظور ساخت وکتور خودکشی، درون وکتور (-) pBluescriptIISK کلون گردید. بدنبال انتخاب سویه موتان، حذف ژن per با انجام واکنشهای PCR با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و تعیین توالی قطعه تکثیر یافته، بررسی شد. با مقایسه محصول واکنشهای RT-PCR انجام یافته از سویه های وحشی و موتان، عدم بیان PER بررسی شد. سویه حاصل یک سویه موتان دارای نقص در ساختار LPS خود بوده و درنتیچپجه علاوه بر کاهش خطا در تمایز ما بین حیوان واکسینه شده و آلوده در تست های تشخصی، می تواند با انجام تست های ایمنولوژیکی بعنوان یک سویه کاندید واکسن مورد بررسی قرار بگیرد.

حذف ژنی، پروزامین سنتتاز، بروسلا ملی تنسیس Revl، وکتور خودکشی