رامین کریمی - کارشناس ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی مرکز تحقیقات بیولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه
علی مصطفایی - استادیار گروه ایمونولوژی مرکز تحقیقات بیولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه
بهمن تبرایی - استادیار گروه واکسن های باکتریایی انستیتو پاستور ایران
یدالله بهرامی - کارشناس ارشد میکروب شناسی مرکز تحقیقات بیولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی کرمانشاه

ایمونوبلات از روشهایی است که بطور معمول برای مطالعه واکنش بین آنتی بادی و آنت ی ژن مورد استفاده قرارمی گیرد. واسرشته شدن برخی از پروتئین ها در ایمونوبلاتینگ می تواند تأثیر اساسی روی این واکنش بگذارد . در اینپژوهش واکنش پروتئین های پیکره بروسلا آبورتوس (S19) با سرم جدا شده از گونه های انسان و بز مبتلا به بروسلوز و خرگوش ایمن شده با بروسلا با روش ایمونوبلاتینگ و کروماتوگرافی جذبی مورد بررسی قرار گرفتند.پس از کشت انبوه باکتری، استخراج آنتی ژن های پیکره بروسلا آبورتوس با زو یترجنت 14-3 و لیزوزیم انجام گرفت. فراکسیون گاماگلوبولین سرم انسان، بز و خرگوش توسط آمونیوم سولفات رسوب داده شد . پروتئین هایپیکره بروسلا آبورتوس از ستون کروماتوگرافی جذبی که لیگاند مورد استفاده در آن فراکسیون گاماگلوبولین انسان، بزیا خرگوش بود، عبور داده شد. برای بررسی واکنش پروتئین های باکتری با سرم ها از دو روش SDS-PAGE و ایمونوبلاتینگ استفاده شد. SDS-PAGE و ایمونوبلات پروتئی ن های جذب شده و جذب نشده به ستونهای کروماتوگرافی جذبی حاوی لیگاند گاماگلوبولین انسان، بز و خرگوش نشان داد که آنتی ژن های پیکره بروسلا را از نظر واکنش با آنتی بادی می توان بهچهار دسته تقسیم کرد : آنتی ژن هایی که در هر دو حالت طبیعی و واسرشته با آنتی بادی واکنش می دهند.آنتی ژن هایی که در حالت طبیعی با آنت ی بادی واکنش می دهند اما در حالت واسرشته واکنشی با آنتی بادی نمی دهند.آنتی ژن هایی که در حالت طبیعی با آنتی بادی واکنش نمی دهند اما در حالت واسرشته با آنتی بادی واکنش می دهند.آنتی ژن هایی که نه در حالت طبیعی و نه در حالت واسرشته با آنتی بادی واکنش نمی دهند.بطورکلی نتایج نشان داد که بررسی واکنش آنتی ژن و آنت ی بادی با دو روش کروماتوگرافی جذبی وایمونوبلاتینگ تفاوت های قابل ملاحظه ای دارند و تفسیر نتایج ایمونوبلاتینگ در خصوص بخشی از پروتئی ن ها چندانقابل اعتماد نیست.

ایمونوبلات ، بروسلا آبورتوس ، کروماتوگرافی جذبی