کژوان ساعدموچشی - دانشجوی کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی پردیس ابوریحان دانشگاه تهران.
نامجو ساعدموچشی - دانشجوی کارشناسی اصلاح نباتات دانشکده کشاورزی دانشگاه کردستان

به منظورکلون کردن ژن، ابتدا باید ژن مورد نظر از سایر آلودگیها )پروتیین، باندهای غیرتخصصی و پرایمردایمرها و ...( جدا شود و سپس از این ژن خالصسازی شده جهت نوترکیبی پلاسمید باکتری E.coli استفاده شود. تابه حال از روشهای شیمیایی و فیزیکی مختلفی برای خالص سازی ژن موردنظر از سایر آلودگیهای ژنی استفاده میشد، اما در این مقاله سعی شده است از یک روش فیزیکی جدید با استفاده از خالص سازی ژن توسط میدان الکتریکی درون مایع TAE.1X استفاده شود. با توجه به اینکه قابلیت اتصال ژن خالصسازی شده به پلاسمید باکتریایی، به منظور نوترکیبی پلاسمید و کلونکردن ژن موردنظر، تا حد زیادی به حلال ژن بستگی دارد و اینکه تابه حال در روشهای معمول شیمیایی از آب دوبار تقطیر جهت حل کردن ژن خالص سازی شده از ژل آگارز استفاده میشد اما در این روش برای حلکردن ژن خالص سازی شده از ژل آگارز، به جای آب دو بار تقطیر از TAE.1X استفاده شده است. در این تحقیق اتصال ژن خالص سازی شده به پلاسمید و همچنین قابلیت کلونکردن این ژن توسط باکتری E.coli سویه DH5α مورد آزمایش قرار گرفت. در این پژوهش از تکثیر ژن FJ755158.1( PqHMGR ( توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز با استفاده از آغازگرهای طراحی شده از توالی های cDNA مربوط به HMG- COA ردوکتاز از گیاه جنسینگ ) Panax quinquefolius ( استفاده شد. در نهایت ژن PqHMGR توسط دستگاه و روش مذکوربه خوبی خالصسازی شد و همچنین توسط باکتری E.coli سویه DH5α به درستی کلون شد. پلاسمید نوترکیب کلونشده، ب همنظور تایید موفقبودن همسانه سازی و همچنین توالی یابی به شرکت Bioneer ارسال شد. این وسیله در مرکز مالکیتهای معنوی با شماره اظهارنامه: 139550140003000025 و رمز: 22396 ثبت اختراع شده ا ست.

ژل آگارز، خالصسازی ژن از ژل، نوترکیبی پلاسمید، TAE. 1X ،PqHMGR