ناهید مسعودی - گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران
احمد روحی بخش - گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران
محمدحسن عصاره - موسسه تحقیقات ثبت و گواهی بذر و نهال، کرج، ایران
مسعود نادرپور - موسسه تحقیقات ثبت و گواهی بذر و نهال، کرج، ایران
داود کولیوند - گروه گیاهپزشکی، دانشکده کشاورزی، دانشگاه زنجان، زنجان، ایران

بیان ژن ویروسها در باکتری برای مطالعه پروتیین ویروسها و تولید آنتی بادی اختصاصی مورد استفاده قرار میگیرد. در این پژوهش، نمونه های سیب زمینی از هشت استان ایران جمع آوری شده و ردیابی ویروس Potato virus S، به عنوان یکی از مخربترین ویروسهای سیب زمینی، بوسیله داس-الیزا و آرتی-پیسیآر انجام گرفت. تعیین گروه غالب با توجه به توالی ژن پوشش پروتیینی و پس از تجزیه فیلوژنی انجام شد. ژن کامل CP تکثیر و همسانه سازی شده و مورد توالی یابی قرار گرفت، سپس از پلاسمید pJET1.2/blunt برش داده شده و به پلاسمید بیان pET-28a (+) متصل شد و سازه (pET-28a:PVS:CP) به باکتری Escherichia coli سویه BL21 منتقل شد. بهینه سازی بیان ژن با القا بوسیله IPTG در غلظتهای 0/5، 1 و mM 2 به مدت 3، 4 و 6 ساعت انجام گرفت و توسط SDS-PAGE و وسترن بلات تایید شد. بر اساس توالی نوکلیوتیدی، جدایه های ایرانی PVS به سه گروه تقسیم شدند که یک گروه با 22 عضو به عنوان گروه غالب شناخته شد. بیان پروتیین نوترکیب با وزن 34 کیلودالتون توسط وسترن تایید شد. القاء با غلظت 1 میلیمولار IPTG و به مدت 4 ساعت بهترین بیان را نشان داد. این نخستین گزارش بیان ژن پوشش پروتیینی ویروس PVS است که برای تهیه آنتیبادی این ویروس اهمیت دارد.

ویروس اس سیب زمینی، بیان ژن،پروتیین نوترکیب، تجزیه فیلوژنتیکی، PVS