ساخت کتابخانه ژنی از مصدومین مارگزیده و تولید قطعه Fab پادتن پلی کلونال نوترکیب با فناوری نمایش فاژی با استفاده از کتابخانه ژنی ساخته شده

مسمومیت ناشی از مارگزیدگی یک تهدید جدی در بسیاری از کشورها از جمله ایران است. بهترین درمان برای مارگزیدگی استفاده از پادزهرها می باشد، بااین حال پادزهرهای اسبی بی عیب نبوده و نیاز به بهبود دارند. در این مطالعه کتابخانه ای ژنی نوترکیب ایمونوگلوبولین انسانی برعلیه زهر تعدادی مار زهری ساخته و بعد با روش نمایش فاژی قطعه Fab در باکتری بیان گردید. بااستفاده از لنفوسیتهای خون محیطی دو مصدوم مارگزیده بهبود یافته و پی سی آر معکوس، cDNA ساخته و سپس ژنهای زنجیره سنگین (Fd) و سبک بعد از تکثیر، تخلیص و هضم با آنزیمهای SpeI و XhoI )زنجیره سنگین) و XbaI و SacI (زنجیره سبک) در طی دو مرحله در داخل وکتور pComb3x جاسازی شدند. و با ترانسفورم کردن وکتور مذکور به داخل باکتری اشریاشیاکولی، کتابخانه Fab تشکیل گردید. برای تایید، پلاسمیدهای دوازده کلون از کتابخانه با آنزیم SfiI هضم گردیدند که شش عدد از آنها دارای قطعه bp1400 بودند. اندازه کتابخانه 105× 9/4 محاسبه گردید. با تعیین توالی تعدادی از کلونهای کتابخانه و انجام همردیفی و بلست، قرارگیری زنجیره ها در داخل وکتور تایید و میزان مشابهت ها تعیین گردید. با کشت کلونهای کتابخانه و استفاده از فاژکمکی KO7M13، فاژهای نوترکیب بیان کننده ی Fab، تولید و با استفاده از فاژالایزا وجود آنها تایید و در سنجش برروی موش سوری بیشترین قدرت آن در بین شش زهر، بر روی زهر افعی جعفری با LD5042/3 تعیین گردید. سپس با استفاده از باکتری روزتاجی، Fab خام محلول با غلظت mg/cc 11/3 تولید گردید و بعد از آن با آزمایش الایزا و SDS-PAGE، مورد تایید قرار گرفت که با آزمایش در موش سوری قدرت خنثی کنندگی LD50/cc7 از زهر افعی جعفری را نشان داد. با توجه به نتایج بدست آمده، به نظر میرسد کتابخانه ساخته شده بستر مناسبی برای جداسازی پادتنهای Fab با قابلیت خنثی کنندگی آنتی ژنهای زهر افعی جعفری ایرانی باشد