تهیه آنتی بادی مونوکلنال علیه ویروس واکسینال تیپ دوفلج اطفال

درسال‮‭1975‬کوهلر ومیلشیتن درآزمایشگاه بیولوژی مولکولی دانشگاه کمبریج فناوری خاصی برای تولید حجم قابل توجهی از آنتی بادی با ساختمان و خواص مشخص از جمله ویژگی یکسان را معرفی کردند. این فناوری درسالهای بعد مطالعه وفعالیت درحوزه علم ایمنی شناسی وبسیاری دیگرازعلوم بیولوژی و پزشکی را متحول کرد. فراورده حاصل تحت عنوان منوکلونال آنتی بادی از اهمیت قابل توجهی در تحقیق، تشخیص، درمان، تولید و کنترل کیفی دارو و فراوردههای بیولوژیک و... برخوردار است. از طرفی به علت گرانی تهیه این محصول از خارج از کشور، واردات این فراورده مقرون به صرفه نمی باشد، لذا این مطالعه برای تهیه آنتی بادی منوکلونال علیه ویروس تیپ دو واکسینال فلج اطفال جهت انجام مطالعات و پروژه های تحقیقاتی با این ویروس و همچنین انجام استاندارد آزمایشهای کنترل کیفی واکسن فلج و معتبر سازی آزمایشات طراحی شده است.در این مطالعه تعداد ‮‭250‬کلون هیبریدوما بدست آمده که با آزمایش غربالگری ( ‮‭10‬ ‭( ELISA ‬کلون که دارای بالاترین تیتر آنتی بادی علیه تیپ دو ویروس پولیو و همچنین کمترین میزان واکنش متقاطع با سایر تیپ ها را داشتند، انتخاب شدند. پس از دو مرحله ‭Limit Dilution ‬در نهایت از بین این کلونها 2 کلون که قابلیت ترشح منوکلنال آنتی بادی نوترالیزان فقط علیه تیپ 2 ویروس پولیو داشتند، برای تولید منوکلونال آنتی بادی انتخاب شدند. در مرحله بعد ویژگیهای این منوکلونال آنتی بادیها در آزمایشات سنجش تیتر آنتی بادی (به روش الایزا)، ایزوتایپ منوکلونال آنتی بادی، آنالیز اپی توپهای منوکلونال آنتی بادی به روش وسترن بلات ‭(Western blot)‬، وجود یا عدم وجود واکنش متقاطع با سایرتیپهای ویروس پولیو ‭(Cross Reactivity )‬با استفاده از آزمایش خنثی سازی ، آزمایش پایداری‭(Stability test )‬، آزمایش استریلیتی وآلودگی احتمالی به مایکوپلاسما مورد بررسی قرار گرفت.منوکلونال آنتی بادیهای تولید شده از نوع ‭IgG‬1 و دارای زنجیره کاپا بودند. آزمایش ‭Western blot ‬مشخص نمود که باند همسانی در محدوده ‮‭26‬ کیلودالتون که مربوط به پروتیین نوترالیزان ‭VP‬3 ویروس می باشد، تشکیل شد. همچنین مونوکلونال آنتی بادیهای تولید شده فاقد واکنش متقاطع بوده و دارای پایداری مناسبی بودند. به این ترتیب می توان از این منوکلونال آنتی بادیها برای اهداف مشخص استفاده کرد. واژه های کلیدی: واکسن فلج اطفال - مونوکلونال آنتی بادی- کنترل کیفی- هیبریدوما