جداسازی و شناسایی سویه های بومی باسیلوس دارای پتانسیل تولید آنزیم آلفا-آمیلاز از مزارع برنج و سیب زمینی

آمیلازها از جمله آنزیم های مهم صنعتی محسوب می شوند که حدود %‮‭25‬ بازار جهانی آنزیم ها را به خود اختصاص داده اند. تولید این آنزیم از منابع میکروبی در صنعت متقاضی های بسیار زیادی دارد. بیشتر آنزیم های تجاری که منشا قارچی دارند از ‭Aspergillus sp ‬و انواع باکتریایی نیز از ‭Bacillus sp ‬تهیه می شوند. در بررسی حاضر ‮‭157‬ جدایه باسیلوس از مزارع برنج و سیب زمینی کشور جمع آوری گردید. بر اساس غربال کیفی و کمی در شرایط متفاوت دما و ‭pH ‬سویه S7‭e ‬به عنوان سویه منتخب و تولید کننده آنزیم آلفا آمیلاز برای ارزیابی های بعدی انتخاب شد. شناسایی بیوشیمیایی و مولکولی (مبتنی بر توالی یابی ژن ‮‭16‬ ‭SrDNA) ‬نشان داد که سویه منتخب متعلق به گونه ‭B. subtilis ‬می باشد. به منظور تعیین شرایط بهینه فعالیت کاتالیتیکی آلفا آمیلاز تولید شده در سطح ارلن از روش سطح پاسخ استفاده شد. نتایج آنالیز طرح مرکب مرکزی نشان داد که مدل درجه سه به عنوان مدل مناسب برای پیش بینی متغیر پاسخ مناسب می باشد (%‮‭96‬‭=R‬2). نتایج حاصل از آنالیز واریانس نشان داد که اثرخطی دو متغیر دما و ‭pH ‬تاثیر مثبت و معنی داری بر فعالیت آنزیم آلفا آمیلاز دارد. همچنین نتایج نشان داد که اثر متقابل متغیرها و اثر درجه دوم هر کدام به تنهایی به صورت منفی و معنی داری بر فعالیت آنزیم آلفا آمیلاز تاثیر می گذارند (‮‭05.0‬‭> P). ‬بررسی پایداری آنزیم در ‭pH ‬و دماهای متفاوت نشان داد که آنزیم مورد بررسی از پایداری مناسبی در ‭pH ‬های متفاوت و دو دمای ‮‭60‬ و‮‭65‬ ‭C ‬برخوردار است. همچنین بر اساس نتایج بدست آمده، مشخص شد که یون های ‭Cu‬2+، ‭Hg‬2+، ‭Zn‬2+، ‭Fe‬2+، ‭Ca‬2+ و ‭SDS ‬بیشترین تاثیر را در کاهش فعالیت آنزیم دارند در حالیکه یون منگنز تاثیر افزایشی در فعالیت آنزیمی داشت. همچنین غلظت های متفاوت یون های ‭Mg‬2+، ‭K+ ‬،‭Na+ ‬و ‭Li+ ‬هیچ تاثیری بر فعالیت آنزیم نداشتند. بر اساس نتایج حاصله سویه ‭B.subtilis strain S‬7‭e ‬به منظور استفاده در پروژه های بعدی انتخاب شد. واژه های کلیدی: آلفا آمیلاز، جداسازی، ویژگی ، ‭Bacillus subtilis