انجام مطالعات ‭in silico‬، جداسازی، همسانه سازی و تولید پروتیین نوترکیب ‭HrpE ‬باکتری ‭Xanthamonas citri subsp. citri‬

مرکبات از جمله مهمترین محصولات کشاورزی در مناطق جنوبی و شمال کشور می باشند. همه ساله تولید این محصولات تحت تاثیر انواع آفات و بیماری ها با مشکلات جدی روبرو می باشد. بیماری شانکر باکتریایی مرکبات از جمله مهمترین بیماری ها در باغات لیموترش در مناطق جنوبی کشور می باشد. این بیماری توسط باکتری ‭Xant homonas citri subsp. citri‬ایجاد شده و باعث ایجاد زخم هایی روی برگ، ساقه و میوه می شود. از عوامل مهم در فرایند ایجاد بیماری توسط این باکتری، انتقال پروتیین های افکتور به سلول میزبان توسط سیستم ترشحی نوع 3 می باشد. یکی از مهمترین اجزا این سیستم، پروتیین پیلوس می باشدکه توسط ژن ‭hrpE ‬کد می شود. هدف از اجرای این پروژه جداسازی، بیان ژن و تولید پروتیین نوترکیب خالص ‭HrpE ‬می باشد. برای این منظور، ابتدا طراحی پرایمر بر اساس ترادف های موجود در بانک ژن صورت پذیرفت و جداسازی ژن مذکور از از ژنوم باکتری جدایه ‮‭088‬‭-NIGEB ‬انجام گرفت. همسانه سازی ژن جدا شده، ابتدا در ناقل کلونینگ ‭pTZ‬‮‭57‬‭R/T ‬انجام گرفت و سپس با انجام هضم آنزیمی در ناقل بیانی باکتریایی کلون گردید. تولید پروتیین نوترکیب در باکتری ‭E. coli ‬انجام شد. نتایج بیان ژن پس از القا در ژل پلی اکریلامید مورد بررسی قرار گرفت. خالص سازی پروتیین نوترکیب با استفاده از ستون کروماتوگرافی حاوی یون نیکل انجام گرفت. جهت تایید نتایج حاصله از آزمون وسترن بلاتینگ با استفاده از آنتی بادی اختصاصی دنباله شش تایی هیستیدین صورت گرفت. نتایج حاصله حاکی از خلوص بالای پروتیین نوترکیب پیلوس می باشد که می تواند برای تولید آنتی بادی های پلی و مونوکلونال مورد استفاده قرار گیرد. لغات کلیدی: شانکر باکتریایی مرکبات، ‭Xanthomonas citri Subsp. citri‬، پروتیین نوترکیب، پیلوس