خالص سازی کوکلودینیوم و بررسی مقایسه ای روش های کشت انبوه آن

کوکلودینیوم‭Cochlodinim polykrikoides) ) ‬یک دینوفلاژل بوده که با شکوفایی خود در آبهای ساحلی جهان بعنوان یکی از عوامل مرگ و میر ماهیان شناخته شده و از سال ‮‭1387‬ در آبهای خلیج فارس مشاهده شده است. پس از خالص سازی جلبک کوکلودینیوم با استفاده از نور، کشت جلبک کوکلودینیوم با استفاده از محیط کشت های مختلفی شامل ‭f/‬2‭(modyfied)‬، گیلارد ‭(f/‬2‭-Si)‬، ‭TMRL‬، ‭Conway‬، ‭ESM ‬و محیط حاصله از مخلوط سازی آب شور با رسوبات ساحلی انجام شد. کشت کوکلودینیوم در لوله های آزمایش، ارلن های ‮‭200-1000‬ میلی لیتری و آکواریوم های ‮‭16‬ لیتری (هر یک با ‮‭10‬ لیتر آبگیری) با 3 تکرار در هر تیمار انجام گرفت. فقط محیط کشت گیلارد ‭f/‬2 ‭(modyfied) ‬امکان کشت انبوه این گونه را در حد آکواریوم میسر ساخت. کشت کوکلودینیوم با استفاده از محیط کشت ‭TMRL ‬در آکواریوم نتایج مطلوبی را نداشته و فقط در یک آکواریوم از 3 آکواریوم تراکم تا ‮‭910000‬ سلول در لیتر رسید. استفاده از محیط کشت گیلارد ‭f/‬2 ‭(modyfied) ‬در لوله آزمایش و ارلن های ‮‭100‬ میلی لیتری تا ‮‭1000‬ میلی لیتری موجب شکوفایی مناسب کوکلودینیوم گردید. که حداکثر تعداد شمارش شده در تیمارها (با 3 تکرار در هر تیمار) درلوله آزمایش /‮‭3/283/000‬ سلول (در مدت ‮‭15‬ روز)، در ارلن ‮‭200‬ میلی لیتری /‮‭6/393/000‬ سلول (درمدت ‮‭22‬ روز)، در ارلن ‮‭500‬ سی سی /‮‭2/833/000‬ سلول (در مدت‮‭40‬ روز) و در آکواریوم /‮‭3/600/000‬ سلول (در مدت ‮‭46‬ روز) اندازه گیری گردید. البته کشت جلبک با استفاده از محیط کشت ‭TMRL ‬در لوله آزمایش و ارلن ها با موفقیت انجام، ولی با افزایش حجم ارلن ها سرعت تکثیر و شکوفایی کوکلودینیوم کمتر از محیط کشت گیلارد ‭f/‬2 ‭(modyfied) ‬بود. بیشترین میانگین حاصله از جلبک کوکلودینیوم در هر لیتر از تیمارها، با استفاده از محیط کشت ‭TMRL ‬در لوله آزمایش /‮‭2/683/000‬ سلول (در مدت ‮‭12‬ روز)، در ارلن ‮‭100‬ سی سی /‮‭3/207/000‬ سلول (در مدت ‮‭36‬ روز)، در ارلن ‮‭250‬ میلی لیتری /‮‭3/040/000‬ سلول (در مدت ‮‭18‬ روز)، در ارلن ‮‭1000‬ میلی لیتری /‮‭2/325/000‬ سلول (در مدت ‮‭34‬ روز) در آکواریوم /‮‭550/000‬ سلول (در مدت ‮‭28‬ روز) بوده است. تکثیر ناموفق کوکلودینیوم در محیط کشت‭Conway ‬، گیلارد ‭(f/‬2‭-Si) ‬و محیط حاصله در زمان ترکیب آب با شوری ‮‭32‬ قسمت در هزار و رسوبات ساحلی، حتی در لوله های آزمایش، نشانگر عدم مناسب بودن محیط های ذکر شده می باشد. در زمان استفاده از محیط کشت ‭ESM‬، با افزایش اندازه ارلن، این محیط کشت، از اثرات مثبت کمتری برخوردار و فقط در لوله های آزمایش و ارلن های ‮‭100‬ میلی لیتری تا حدودی موفق بود. در واقع می توان نتیجه گرفت که شکوفایی و کشت انبوه کوکلودینیوم نیازمند شرایط خاص و محیط کشت ویژه ای است که فقط با استفاده از محیط کشت گیلارد ‭f/‬2 ‭(modyfied) ‬تحقق یافته است. حداکثر تراکم ایجاد شده در تحقیق حاضر ‮‭6/5‬ میلیون سلول در لیتر در یک آکواریوم (میانگین تعداد در 3 تکرار از این تیمار /‮‭3/600/000‬ سلول در لیتر) با محیط کشت ‭f/‬2 ‭(modified) ‬بوده است. با توجه به موارد ذکر شده می توان به ارجحیت محیط کشت گیلارد ‭f/‬2 ‭(modyfied) ‬نسبت به محیط کشت ‭TMRL ‬و سایر محیط های کشت مورد استفاده پی برد. کلمات کلیدی: کوکلودینیوم، محیط کشت های مختلف، تراکم سلولی، شرایط آزمایشگاهی.