بررسی تهیه و ارزیابی آنتی ژن کشته ‭K99 E.coli ‬از سوشهای موجود در موسسه رازی در مقیاس آزمایشگاهی

اسهال ناشی از اشریشیاکلیK‮‭99‬ در گوسالهصها بویژه در نخستین روزهای پس از تولد، به علت تلفات و خسارات اقتصادی حاصله از اهمیت زیادی برخوردار است. در این مطالعه از یک طرف میزان شیوع بیماری اشریشیاکلیK‮‭99‬ در استان فارس بررسی شد . و از طرف دیگر پس از جدا سازی سویه های مذبور به همراه سویه های ارسالی از موسسه رازی اقدام به خالص سازی آنتی ژن فیمبری آن گردید. در طی این تحقیق سوآب رکتوم از گوسالهصهای ‮‭30-1‬روزه در مدت یک سال (‮‭1387‬تا ‮‭1389‬) جمعص آوری شد. جهت جداسازی نمونه ها بر روی محیطصهای مک کانکی آگار و ایوزین متیلن بلو و مینکا کشت شد و برای شناسایی سروگروه های اشریشیاکلی K‮‭99‬ به روش اسلاید آگلوتیناسیون مورد استفاده قرار گرفت. با استفاده از روشهای سونیکه کردن، ‭Bead‬، و حرارت آنتی ژن نمونه های K‮‭99‬ مثبت خالص شد. میزان آنتی ژن بدست آمده در هر مورد با روش لوری تعیین گردید. برای رویت خلوص باندهای پروتیینی از روش ‭SDS-Page ‬استفاده شد. در نهایت با استفاده از ستون گروماتوگرافی آنتی ژن بدست آمده تا حد امکان خالص شد. نتایج نشان داد از ‮‭280‬ اشریشیاکلی جداشده ‮‭16‬ مورد (7/%5) دارای فیبریه K‮‭99‬ بود. همین تعداد با آنتی سرمهای مونووالان O8و O‮‭20‬ در تست آگلوتیناسیون منفی شد. اما با آنتی سرمهای O9 و O‮‭101‬ واکنش مثبت نشان دادند. نتایج خالص سازی با روشهای مختلف حرارت، ‭Bead‬و سونیکه مشخص ساخت روش حرارت ‮‭60‬ درجه به مدت ‮‭20‬ دقیقه آنتی ژن خالصتری نسبت به بقیه روشها بدست داد. به همین منظور از روش کروماتوگرافی استفاده شد که بسیار مثمر ثمر بود. لذا با ستون ‭Affinity chromatography ‬با استفاده از ژل سفاروز 4 ب فعال شده با سیانوژن بروماید تنها یک باند که مربوط به آنتی ژن K‮‭99‬ بود بدست آمد. میزان آنتی ژن بدست آمده بین ‮‭1/5‬ تا ‮‭2/3‬ میلی گرم در میل لیتر متغیر بدست آمد. باندهای مورد نظردر هر روش با استفاده از ‭SDS-Page ‬قابل مشاهده بود. اگر چه مطالعات زیادی در ارتباط با عفونت و بیماریزایی این باکتری انجام گرفته است، اما بجز بررسی میزان شیوع در یکی دو مورد مطالعه، تاکنون در زمینه بررسی سروگروهصهای ‭O ‬شایع در ایران مطالعه چندانی صورت نگرفته است. در ارتباط با خالص سازی آنتی ژن نیز هیچ موردی در ایران یافت نشد. با توجه به اینکه تهیه این آنتی ژن زمینه برای تولید واکسن را فراهم ساخته است، امید است در آتیه نزدیک این امر محقق گردد. واژگان کلیدی: اشریشیاکلیK‮‭99‬، آنتی ژن، فارس