بررسی کلونینگ و بیان ژن ‭VP2 ‬و قطعه ‭A ‬ویروس بورس عفونی طیور در مخمر

بیماری بورس عفونی، یکی از مهمترین بیماری های جوجه های صنعتی است که باعث خسارات گسترده اقتصادی می گردد. ویروس با تخریب بافت لنفاوی بورس فابریسیوس باعث تضعیف سیستم ایمنی جوجه ها گردیده و علاوه بر تلفات ایجاد شده، به عنوان عامل مستعد کننده بسیاری از بیماریهای ویروسی، باکتریایی و قارچی دیگر محسوب می گردد. واکسیناسیون یکی از مهمترین راههای پیشگیری از این بیماری است. در حال حاضر با توجه به ظهور سویه های واریانت و بسیار حاد ویروس و همچنین امکان افزایش حدت ویروس در شرایط مزرعه، تولید واکسن های نوترکیب در مورد این بیماری به شکل جدی مطرح گردیده است. هدف این تحقیق دستیابی به تکنولوژی کلونینگ و بیان ژن ‭VP‬2 در سیستم کارا و مناسب مخمر پیشیاپاستوریس است. همچنین امکان کلونینگ و بیان قطعه ‭A ‬ویروس نیز از دیگر اهداف می باشد. ژن ‭VP‬2 ویروس واکسن بیماری بورس عفونی سویه D‮‭78‬، با استفاده از دو جفت پرایمرهای اختصاصی طراحی شده بر اساس سیستم ترشحی و غیر ترشحی ناقل پلاسمیدی مخمر، تکثیر گردید. پس از هضم این ژنها و ناقل های پلاسمیدی با آنزیم های محدودگر ‭ECOR I ‬و ‭Xba I‬، امکان کلونینگ آن در باکتری اشریشیاکلی سویه ‭ TOP‬1‭OF ‬فراهم گردید. و قبل از بیان، ردیف نوکلیوتیدی کلون های بدست آمده تعیین توالی شد. پس از پذیرا نمودن مخمر و خطی کردن کلون های مربوطه توسط آنزیم ‭PmeI ‬ترانسفورماسیون بوسیله روش الکتروپوریشن انجام گردید. کلون های نوترکیب مخمری پس از تایید حضور ناقل پلاسمیدی حاوی ژن مورد نظر در آن در یک "محیط کشت حداقلی" به مدت شش روز رشد داده شد و هر روز توسط متانول بیان، القا گردید. پروتیین های بیان شده در آزمایش ‭SDS-PAGE ‬و وسترن بلات تایید گردیدند. در مورد قطعه ‭A ‬نیز، دو قطعه A1 ‭(bp‬‮‭1600‬( و ‮‭1450‬ ‭bp) A‬2( بوسیله ‭RT-PCR ‬تکثیر گردید و توسط آزمایش ‭Assembly PCR‬، دو قطعه به یکدیگر متصل و قطعه ‭A ‬حاصل شد و بقیه مراحل نیز شبیه ژن ‭VP‬2 در سیستم غیر ترشحی مخمر عمل گردید. میزان بیان ژن ‭VP‬2 در سیستم ترشحی ‮‭0/67‬ میلی گرم در لیتر و در سیستم غیر ترشحی6 میلی گرم در لیتر گزارش شد. همچنین قطعه ‭A ‬ویروس در مخمر بیان نگردید. با دستیابی به این تکنولوژی، امید است با تکمیل مطالعات انجام یافته، امکان تهیه" واکسن نوترکیب تحت واحدی ویروس بیماری بورس عفونی" در کشور محقق گردد. واژه های کلیدی : ویروس بورس عفونی طیور‭- VP‬2- قطعه ‭A- ‬کلونینگ- بیان- پیشیا پاستوریس