تولید آنتی بادی نوترکیب بر علیه ویروس تریستزای مرکبات

مرکبات از جمله مهمترین محصولات باغی در نواحی جنوبی و شمالی کشور می باشد. بیماری های ویروسی همه ساله خسارات فراوانی به باغات مرکبات وارد می نمایند. بیماری تریستزای مرکبات یکی از مخرب ترین بیماری های مرکبات در مناطق شمالی و جنوبی کشور به شمار می رود. این بیماری توسط Citrus tristeza virus(CTV) ایجاد می شود. روش های سنتی جهت کنترل بیماری قابلیت محدودی در مدیریت بیماری دارند. امروزه بیوتکنولوژی مولکولی روش های جدید و موثری برای کنترل بیمارگرها در گیاهان فراهم کرده که امکان تولید گیاهان تراریخت مقاوم به ویروس یکی از این موارد می باشد. تولید گیاه مقاوم به بیمارگر با کمک آنتی بادی، بر اساس بیان آنتی بادی های نوترکیب متصل شونده به پروتیین های ضروری و حیاتی بیمارگر و جلوگیری از گسترش آن در گیاه است. در مطالعه حاضر تولید و تعیین خصوصیات آنتی بادی های نوترکیب اختصاصی علیه پروتیین پوششی ویروس تریستزای مرکبات انجام گرفت. تکنیک نمایش فاژی امکان انتخاب آنتی بادی های نوترکیب ویژه علیه یک آنتی ژن خاص را فراهم کرده است. در این تحقیق پروتیین پوششی ویروس تریستزای مرکبات به صورت نوترکیب در سویه BL21باکتری Escherichia coli تولید گردید. خالص سازی پروتیین در شرایط طبیعی و با روش کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. پروتیین نوترکیب خالص به منظور غربال گری کتابخانه های نمایش فاژی جهت تهیه آنتی بادی های نوترکیبsingle-chain variable fragment(scFv) استفاده شد. پروتیین پوششی نوترکیب جهت پنینگ کتابخانه های نمایش فاژی Tomlinson I&Jاستفاده شد و در نهایت 96 کلنی انتخاب و توانایی تولید آنتی بادی نوترکیب (scFv) توسط آنها با آزمون های الایزا و ایمنوبلات بررسی شد. آنتی بادی های نوترکیب تولید شده در آزمون الایزا جهت شناسایی نمونه های گیاهی آلوده به تریستزای مرکبات و پروتیین CP نوترکیب استفاده گردید و اختصاصی بودن آنتی بادی های نوترکیب منتخب تایید شد. در نهایت ژن آنتی بادی نوترکیب که اختصاصیت و قابلیت اتصال بالا به پروتیینCP داشت تعیین ترادف گردید. لغات کلیدی: بیماری تریستزای مرکبات، پروتیین نوترکیب، تکنیک نمایش فاژی، آنتی بادی نوترکیب