همسانهسازی ژن پیروات دکربوکسیلاز موثر در تولید بیواتانول در باکتری اشرشیا کلای
سال انتشار: 1395
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 445
فایل این مقاله در 19 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_BJM-5-18_002
تاریخ نمایه سازی: 12 اردیبهشت 1400
چکیده مقاله:
مقدمه: اتانول ساختهشده از زیستتوده یکی از راهبردهای بینظیر و سودمند از لحاظ اقتصادی و محیطی است و میتواند بهعنوان یک سوخت پاک و ایمن، جایگزین سوختهای فسیلی شود. مواد و روش ها: در این پژوهش کلیدیترین آنزیم موثر در مسیر تولید اتانول زیستی (پیروات دکربوکسیلاز) از زایموموناس موبیلیس انتخاب و در اشرشیا کلای بهروش ذوب-انجماد همسانهسازی شد. برای همسانهسازی ژن مدنظر از آغازگرهای اختصاصی ژن پیروات دکربوکسیلاز و واکنش پیسیآر استفاده شد. سپس ژن پیروات دکربوکسیلاز و پلاسمید pET ۲۸a را آنزیمهای محدودکننده Sal I و Xho I برش دادند؛ محصولاتی که آنزیم لیگاز برش دادند در دمای ۱۶ درجه سانتیگراد و در مدت ۱۶ ساعت به همدیگر متصل شدند. نتایج: کشت باکتریها در محیط کشت LB انتخابی نشان داد که تنها کلونیهای حاوی پلاسمید pET ۲۸a قادر به رشد هستند. نتایج کلونی پیسیآر با آغازگرهای اختصاصی باندهایی در اندازه تقریبی ۱۷۰۰ جفت باز را نشان داد. نتایج مربوط به پیسیآر پلاسمیدهای نوترکیب توسط آغازگر رفت راهانداز T۷ و آغازگر برگشت ژن پیروات دکربوکسیلاز، جهت صحیح درج ژن در داخل پلاسمید را ثابت کرد و باندی بهاندازه ۱۸۸۵ جفت باز را نشان داد و نتایج هضم آنزیمی پلاسمیدpET ۲۸a pdc نوترکیب توسط آنزیمهای Sal I و Xho I باندهای مشابهی را آشکار کرد. درنهایت واکنش RT باند مورد انتظار ۱۷۰۰ جفت باز را نشان داد که حاکی از بیان ژن مورد نظر در این نمونهها بود. بحث و نتیجه گیری: از مهمترین مشکلات در بیوسنتز اتانول، محدودیت عملکرد آنزیمهای درگیر در مسیر بیوسنتز اتانول از مواد اولیه نظیر ضایعات کشاورزی است؛ این آنزیمها در تبدیل مواد اولیه پلیمری به مواد اولیه با ساختار ساده و قابل تخمیر نقش اساسی دارند. به نظر میرسد افزایش بیان ژن پیروات دکربوکسیلاز تحت کنترل پروموتور قوی T۷ منجر به افزایش تولید محصول نهایی خواهد شد.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
معصومه زینالی
کارشناس ارشد بیوتکنولوژی کشاورزی، دانشگاه محقق اردبیلی، اردبیل، ایران
بهمن حسینی
دانشیار بیوتکنولوژی گیاهی، دانشگاه ارومیه، ایران
سدابه جهانبخش
دانشیار اصلاح نباتات ، دانشگاه محقق اردبیلی، اردبیل، ایران
محمود رضا زاد باری
دانشیار صنایع غذایی، دانشگاه ارومیه، ایران
میثم طباطبایی
استادیار بیوتکنولوژی میکروبی، پژوهشکده بیوتکنولوژی کشاورزی کرج، ایران
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :