تاثیر ایجاد تغییرات اپی ژنتیکی با کوچک مولکول ها بر بیش بیان ژن بهروش لنتی ویروسی در سلول های بنیادی جنینی

سال انتشار: 1394
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 361

فایل این مقاله در 12 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد

استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:

لینک ثابت به این مقاله:

شناسه ملی سند علمی:

JR_JCT-6-3_010

تاریخ نمایه سازی: 27 اردیبهشت 1400

چکیده مقاله:

هدف: در این مطالعه کارایی روش انتقال ژن به روش لنتی ویروسی و بیش بیان ژن با پروموتر سایتومگالوویروس (CMV) بررسی و تاثیر کوچک مولکول (small molecules) های مهارکننده مسیرهای اپی ژنتیکی بر بیش بیان ژن ارزیابی شده است. مواد و روش ها: سلول های ES  موشی با مقادیر مختلف لنتی ویروس بیان کننده پروتئین فلورسنت سبز (green fluorescent protein; GFP) تراریخت شده و درصد سلول های بیان کننده GFP با روش فلوسایتومتری اندازه گیری شد. ماندگاری بیان GFP در مدت هشت روز بررسی گردید. به کمک لنتی ویروس بیان کننده ژن فاکتور رونویسی پانکراسی و دئودنومی ۱ (Pdx۱)، تاثیر تیمار کوچک مولکول های ۵-آزاسایتادین (۵-AZA)، DZNep و BIX۰۱۲۹۴  بر سیستم بیانی ارزیابی شد. نتایج: انتقال لنتی ویروسی ژن به سلول های ES با استفاده از ضریب آلوده سازی (Multiplicity of infection; MOI) ۱۰ و ۲۰ موجب تراریخت شدن بیش از ۹۰ درصد این سلول ها شد. با این حال، بیان ژن انتقال یافته در طول هشت روز کاهش چشمگیر داشت. کوچک مولکول ۵-AZA در محیط کشت تسهیل کننده تمایز (permissive)، بیان ژن از سیستم لنتی ویروسی را ۵/۲ برابر افزایش داد. همچنین DZNep در محیط های پر توانی (pluripotency) و تسهیل کننده تمایز موجب افزایش بهترتیب ۵/۲۶ و ۹/۵ برابری بیان ژن شد. بیان ژن Pdx۱ داخلی خود سلول نیز در تیمار با DZNep افزایش یافت. نتیجه گیری: انتقال لنتی ویروسی ژن با MOI بیش از ۱۰، روشی کارآمد برای انتقال ژن به سلول های ES موشی است، اما این روش به همراه استفاده از پروموتر CMV موجب خاموش شدن بیان ژن در درازمدت می شود. تیمار با DZNep موجب فعال شدن این سیستم بیانی می شود. اما می تواند با تاثیراتی بر بیان سایر ژن های سلول نیز همراه باشد.  

کلیدواژه ها:

نویسندگان

محسن بصیری

دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده علوم زیستی، گروه ژنتیک، تهران، ایران

مهرداد بهمنش

دانشگاه تربیت مدرس، دانشکده علوم زیستی، گروه ژنتیک، تهران، ایران

یاسر تهمتنی

پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و فناوری سلولهای بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلولهای بنیادی و زیست شناسی تکوینی، تهران، ایران

آزاده مرادمند

پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و فناوری سلولهای بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلولهای بنیادی و زیست شناسی تکوینی، تهران، ایران

حسین بهاروند

پژوهشگاه رویان، پژوهشکده زیست شناسی و فناوری سلولهای بنیادی جهاد دانشگاهی، مرکز تحقیقات علوم سلولی، گروه سلولهای بنیادی و زیست شناسی تکوینی، تهران، ایران

مراجع و منابع این مقاله:

لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :
  • Zhu Z, Huangfu D. Human pluripotent stem cells: an emerging ...
  • Menendez P, Wang L, Bhatia M. Genetic manipulation of human ...
  • Xie X, Cao F, Sheikh AY, Li Z, et al. ...
  • Furuya M, Yasuchika K, Mizutani K-I, Yoshimura Y, et al. ...
  • Lakshmipathy U, Pelacho B, Sudo K, Linehan JL, et al. ...
  • Lorenz P, Harnack U, Morgenstern R. Efficient gene transfer into ...
  • McLenachan S, Sarsero JP, Ioannou P a. Flow-cytometric analysis of ...
  • Ribeiro SC, Mendes R, Madeira C, Monteiro G a, et ...
  • Chung S, Andersson T, Sonntag K-C, Björklund L, et al. ...
  • Eiges R, Schuldiner M, Drukker M, Yanuka O, et al. ...
  • Zwaka TP, Thomson J a. Homologous recombination in human embryonic ...
  • Sakuma T, Barry MA, Ikeda Y. Lentiviral vectors: basic to ...
  • Cockrell AS, Kafri T. Gene delivery by lentivirus vectors. Mol ...
  • Somers A, Jean JC, Sommer C a, Omari A, et ...
  • Hong S, Hwang D-Y, Yoon S, Isacson O, et al. ...
  • Schumacher A, Koetsier P a, Hertz J, Doerfler W. Epigenetic ...
  • Dietz-Pfeilstetter A. Stability of transgene expression as a challenge for ...
  • Li M, Liu G-H, Belmonte JCI. Navigating the epigenetic landscape ...
  • Lund RJ, Närvä E, Lahesmaa R. Genetic and epigenetic stability ...
  • Efe J a, Ding S. The evolving biology of small ...
  • You JS, Han JH. Targeting components of epigenome by small ...
  • Knapp S, Weinmann H. Small-molecule modulators for epigenetics targets. ChemMedChem. ...
  • Issa JPJ, Kantarjian HM. Targeting DNA methylation. Clinical Cancer Research. ...
  • Kubicek S, O’Sullivan RJ, August EM, Hickey ER, et al. ...
  • Miranda TB, Cortez CC, Yoo CB, Liang G, et al. ...
  • Tan J, Yang X, Zhuang L, Jiang X, et al. ...
  • Hassani S-N, Totonchi M, Farrokhi A, Taei A, et al. ...
  • Hassani SN, Totonchi M, Sharifi-Zarchi A, Mollamohammadi S, et al. ...
  • Rassouli H, Nemati S, Rezaeiani S, Sayadmanesh A, et al. ...
  • Smith ZD, Meissner A. DNA methylation: roles in mammalian development. ...
  • Boyer L a, Plath K, Zeitlinger J, Brambrink T, et ...
  • Mikkelsen TS, Ku M, Jaffe DB, Issac B, et al. ...
  • Kang Y-K. SETDB۱ in Early Embryos and Embryonic Stem Cells. ...
  • Kosaka Y, Kobayashi N, Fukazawa T, Totsugawa T, et al. ...
  • Pfeifer A, Ikawa M, Dayn Y, Verma IM. Transgenesis by ...
  • Zhang B, Metharom P, Jullie H, Ellem KA, et al. ...
  • Xia X, Zhang Y, Zieth CR, Zhang S. Transgenes delivered ...
  • Ma Y, Ramezani A, Lewis R, Hawley RG, et al. ...
  • Kawabata K, Sakurai F, Yamaguchi T, Hayakawa T, et al. ...
  • Sheik Mohamed J, Gaughwin PM, Lim B, Robson P, et ...
  • Ward CM, Stern PL. The human cytomegalovirus immediate-early promoter is ...
  • Swindle CS, Klug CA. Mechanisms that regulate silencing of gene ...
  • Hofmann A, Kessler B, Ewerling S, Kabermann A, et al. ...
  • Friedman J, Cho W-K, Chu CK, Keedy KS, et al. ...
  • Christman JK. ۵-Azacytidine and ۵-aza-۲’-deoxycytidine as inhibitors of DNA methylation: ...
  • Shi Y, Desponts C, Do JT, Hahm HS, et al. ...
  • Mikkelsen TS, Hanna J, Zhang X, Ku M, et al. ...
  • نمایش کامل مراجع