طراحی و بیان پروتئین نوترکیب از ژن tcpA ویبریوکلرا در وکتور pET۳۲a(+)
سال انتشار: 1397
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 292
فایل این مقاله در 13 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_SKUMS-20-4_002
تاریخ نمایه سازی: 10 خرداد 1400
چکیده مقاله:
ززمینه و هدف: ویبریوکلرا یک باکتری پاتوژن گرم منفی است که عامل بیماری اسهال است. یکی از مهم ترین عوامل بیماری زایی باکتری ویبریوکلرا است؛ پیلی هم تنظیم شونده با توکسین است که برای کلونیزاسیون باکتری در روده لازم است. هدف از این تحقیق بررسی بیوانفورماتیکی و بیان پروتئین نوترکیب TcpA بود.
روش بررسی: ژن tcpA به لحاظ وجود کدون های نادر بررسی و بهینه سازی ژن با استفاده از نرم افزارهای بیوانفورماتیکی انجام شد. طراحی پرایمر جهت تکثیر ژن سنتزی tcpA انجام گرفت. ژن سنتزی در وکتور pET۳۲a(+) همسانه سازی شد. پلاسمید نوترکیب pET۳۲a(+)-tcpA در باکتری E.coli سویه BL۲۱(DE۳) تراریخت شد. بیان ژن tcpA تحت القای IPTG ۱ میلی مولار انجام گردید. بیان پروتئین نوترکیب با روش SDS-PAGE و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی Ni-NTA استفاده شد.
یافته ها: ژن طبیعی tcpA دارای شاخص انطباق پذیری ۰/۶ بود، در حالی که ژن بهینه سازی شده دارای شاخص انطباق پذیری ۰/۹ بود. با بهینه سازی ژنی درصد کدون های با ترجیح بالا به ۷۵% افزایش یافت. آنالیز آنزیمی همسانه سازی ژن tcpA کلون شده در وکتور pET۳۲a(+) را تایید کرد. پروتئینی با وزن مولکولی ۳۸/۶ کیلو دالتون در SDS-PAGE دیده شده و واکنش آن با آنتی بادی ضد هیستیدین در وسترن بلات تایید گردید. میزان پروتئین خالص شده ۱۱/۵۳۳میلی گرم در لیتر بود.
نتیجه گیری: بهینه سازی ژنی منجر به بیان بالای پروتئین نوترکیب TcpA شد. با توجه به خاصیت آنتی ژنیسیته tcpA، این پروتئین می تواند کاندیدای مناسبی به منظور توسعه ایمنی علیه وبا باشد.
کلیدواژه ها:
Vibrio cholerae ، tcpA ، Codon optimization ، Recombinant protein ، ویبریوکلرا ، پیلی هم تنظیم شونده با توکسین ، بهینه سازی کدونی ، پروتئین نوترکیب.
نویسندگان
میلاد عامریان
دانشگاه جامع امام حسین
شهرام نظریان
دانشگاه جامع امام حسین (ع
حسین هنری
دانشگاه جامع امام حسین (ع
محمد ابراهیم مینایی
دانشگاه جامع امام حسین
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :