نمایش فاکتور رشد اندوتلیال رگی در سطح باکتری با هدف طراحی بیوسنسور سلولی

تکنولوژی نمایش در سطح سلول اخیرا به عنوان یک ابزار قدرتمند در زمینه های زیست فناوری و زیست پزشکی مورد توجه بسیاری قرار گرفته است. در این مطالعه، با استفاده از سیستم نمایش در سطح سلولهای باکتریایی، پروتئین VEGF به واسطه ی اتصال به موتیف های لنگری InaK از پروتئین هسته زایی یخ بر روی سطح E. coli بیان شد. فاکتور رشد سلولهای اندوتلیال (VEGF)، یک تنظیم کننده ی کلیدی در آنژیوژنز فیزیولوژیک و پاتولوژیک میباشد. به منظور طراحی توالی ژنی مورد نظر، ژن تکثیریافته ی VEGF و وکتور pET۲۱a حاوی ژن کدکننده ی پروتئین INP به وسیله ی آنزیم های محدود کننده ی اختصاصی (HindIII/XhoI) مورد هضم آنزیمی قرار گرفت و ژن VEGF درون وکتور الحاق شد. توالی ژنی مورد نظر با موفقیت به درون باکتری(E. coli BL۲۱ (DE۳ انتقال یافت. در ادامه، کلونی های مثبت دیده شد و سلولهای باکتری حاوی وکتور نوترکیب توسط القاکننده ی IPTG در دمای ۲۷ درجه ی سانتیگراد و مدت زمان ۶ ساعت بیان شد. بعد از جمع آوری و لیز سلولها، دیواره ی سلولی باکتریها به منظور ارزیابی نمایش VEGF در سطح سلول، توسط تکنیک SDS-PAGE مورد آنالیز قرار گرفت. نتایج، حاکی از بیان بسیار بالای VEGF در سطح سلول بود. سیستمهای نمایش سطحی نظیر این سیستم میتوانند به عنوان یک پلتفرم مناسب جهت طراحی بیوسنسورهای تمام سلولی در نظر گرفته شوند.