شناسایی و کلون سازی خانواده ژنی چالکون سنتاز گیاه خار مریم (Silybum marianum L.)

سیلی­مارین یک ترکیب فلاونوئیدی است که از دانه های گیاه خارمریم به­دست می­آید و دارای خواص دارویی متعددی می باشد. چالکون­سنتاز نقش کلیدی در مسیر بیوسنتزی فلاونوئیدها دارد بنابراین شناسایی ژن رمزده آن گامی مهم در مهندسی متابولوم گیاه خارمریم می باشد. بدین­منظور پس از جمع آوری داده های توالی موجود در مورد خانواده ژنی چالکون­سنتاز در سایر گیاهان، همردیفی آن­ها و تعیین نواحی حفظ شده، چهار آغازگر دژنره بر اساس این نواحی طراحی شد. قطعات ژنی تکثیر شده در PCR با استفاده از این جفت آغازگر از ژنوتیپ بومی منطقه برازجان و رقم اصلاح شده مجار در ناقل مناسب همسانه سازی و سپس تعیین توالی شدند. مطالعه توالی نوکلئوتیدی حاصل و توالی اسیدآمینه ای آن­ها، منجر به شناسایی دو عضو از خانواده ژنی چالکون­سنتاز در این گیاه گردید. بر اساس نقاط متنوع، شش آغازگر اختصاصی برای هریک از اعضا جهت تکثیر cDNA از روی RNAی کل رقم مجار درسیستمRACE  طراحی شد. قطعات cDNAی تکثیر شده در۳'RACE  و۵'RACE  در ناقل مناسب همسانه سازی و سپس تعیین توالی شدند. توالی کامل cDNAی ژن چالکون سنتاز از همپوشانی توالی­های۵'RACE  و ۳'RACE عضو یک شناسایی گردید که قالب باز خواندنی آن دارای ۱۲۳۹ باز بوده و شامل اگزون یک (۱۹۰ باز) و اگزون دو (۱۰۴۹ باز) می باشد که به ترتیب ۶۳ و ۳۴۹ اسیدآمینه را رمز می­کنند. مطالعه کل توالی های نوکلئوتیدی و اسیدآمینه ای به­دست آمده، منجر­به شناسایی سه عضو از خانواده ژنی چالکون­سنتاز در این گیاه برای اولین بار شد که دارای دومین­های حفظ شده انتهای آمین و کربوکسیل چالکون سنتاز می باشند