شناسایی و تعیین خصوصیت پروتئاز قلیایی از باکتری بومی Bacillus sp RAM۵۳ جدا شده از مزارع برنج مازندران

پروتئازها یکی از مهمترین و پرکاربردترین آنزیمهای پروتئولایتیک صنعتی هستند که در صنایع مختلفی مورد استفاده قرار می گیرند.امروزه جستجو و شناسایی این نوع از آنزیمها از اهمیت ویژهای برخوردار است. در این تحقیق، باکتری بومی Bacillus sp. Ram۵۳جدا شده از مزارع برنج، توسط موسسه تحقیقات برنج آمل تهیه شد. ابتدا باکتری در محیط کشت نوترینت براث در دمای ۷۳ درجه بهمدت ۴۸ ساعت کشت داده شد. سپس جهت تهیه عصاره آنزیمی باکتری با سرعت ۸۰۰۰ g به مدت ۱۰ دقیقه سانتریفیوژ گردید ومحلول رویی حاوی آنزیم ترشحی در دو مرحله با آمونیوم سولفات ۸۰% رسوب گذاری شد و رسوب پروتئینی در بافر Tris-HCL ۲۰ mM حل گردید. میزان فعالیت آنزیم پروتئاز در طیفی از دما و pH مورد بررسی قرار گرفت. جهت شناسایی و جداسازی ژن آنزیم،پرایمر اختصاصی بر اساس همولوژی توالی ژنهای مربوط به پروتئاز قلیایی با منشاء باسیلوسی استخراج شده از پایگاه اطلاعات داده ها،طراحی شد. تکثیر ژن پس از استخراج DNA توسط واکنش زنجیرهای پلیمراز انجام شد. نتایج نشان داد که، این آنزیم دارای بیشترینفعالیت در دمای ۴۰ درجه سانتی گراد است که به عنوان دمای بهینه آنزیم در نظر گرفته شد. همچنین آنزیم از دمای ۲۰ تا ۵۰ درجهسانتی گراد فعالیت نشان داد. همچنین این آنزیم در pH=۹ بیشترین فعالیت را نشان داد که pH بهینه آن بوده و در طیفی از ۶pHتا ۱۲ فعالیت نشان داد. ژن آنزیم پروتئاز با اندازه ۱۱۹۴bp توسط واکنش PCR تکثیر شد.