استخراج آنزیم کراتینیناز و بررسی اثر غلظت های مختلف نانوذرات طلا بر فعالیت آنزیم
سال انتشار: 1401
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 182
فایل این مقاله در 12 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_NCMBJ-12-48_004
تاریخ نمایه سازی: 18 دی 1401
چکیده مقاله:
سابقه و هدف: استفاده از آنزیم کراتینیناز یک روش آنزیمی جهت سنجش میزان کراتین و کراتینین در مایعات بدن با هدف بررسی سلامت کلیه ها است. هدف از این تحقیق، بررسی اثر نانوذرات طلا بر فعالیت و پایداری آنزیم کراتینیناز به جهت استفاده در کیت های سنجش کراتین و کراتینین است.
مواد و روش ها: در این مطالعه ابتدا باکتری E.Coli BL۲۱ حاوی وکتور تکثیری pET۲۸a حاوی ژن آنزیم کراتینیناز در محیط LB مایع کشت و سپس در دمای ۲۸ درجه القا بیان گردید. در ادامه پس از سونیکاسیون، تخلیص آنزیم با کمک کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. پس از تایید بیان با SDS-PAGE ، غلظت آنزیم بیان شده با روش برادفورد سنجش شد. در ادامه فعالیت آنزیم با روش رنگ سنجی در حضور و عدم حضور نانوذرات طلا بررسی و مقایسه گردید. نهایتا اثر نانوذرات طلا بر ساختار آنزیم کراتینیناز با روش طیف سنجی فلورسانس، بررسی گردید.
یافته ها: فعالیت آنزیم کراتینیناز در عدم حضور نانوذرات طلا U/ml ۶/۱۴ و در حضور نانوذرات طلا با غلظت های ۹۷/۱، ۹۴/۳، ۸۸/۷، ۸۲/۱۱، ۷۶/۱۵، ۷/۱۹و ۴/۳۹ نانوگرم بر لیتر به ترتیب U/ml ۱/۱۴، ۴/۱۲، ۲/۱۱، ۱/۱۰، ۴/۸، ۵/۷، ۷/۴ محاسبه گردید که نشان از کاهش فعالیت آنزیم کراتینیناز در حضور نانوذرات طلا دارد. از طرفی طیف سنجی فلورسانس آنزیم کراتینیناز در حضور و عدم حضور نانوذرات طلا در طول موج تهییج ۲۹۵ نانومتر کاهش شدت فلورسانس در حضور نانوذرات طلا را نشان داد.
نتیجه گیری: نانوذرات طلا باعث کاهش فعالیت آنزیم کراتینیناز شدند. همچنین نانوذرات طلا باعث کاهش شدت فلورسانس آنزیم کراتینیناز گردیدند که می تواند نشانگر تغییر در ریزمحیط اسیدآمینه تریپتوفان در ساختار آنزیم کراتینیناز باشد، در نتیجه استفاده از نانوذرات طلا گزینه مناسبی برای پایدارسازی فعالیت و ساختار آنزیم کراتینیناز جهت استفاده در کیت های تجاری نیستند.
اهداف: استفاده از آنزیم کراتینیناز یک روش آنزیمی جهت سنجش میزان کراتین و کراتینین در مایعات بدن با هدف بررسی سلامت کلیه ها است. هدف از این تحقیق، بررسی اثر نانوذرات طلا بر فعالیت و پایداری آنزیم کراتینیناز به جهت استفاده در کیت های سنجش کراتین و کراتینین است.
مواد و روش ها: در این مطالعه ابتدا باکتری E.Coli BL۲۱ حاوی وکتور تکثیری pET۲۸a حاوی ژن آنزیم کراتینیناز در محیط LB مایع کشت و سپس در دمای ۲۸ درجه القا بیان گردید. در ادامه پس از سونیکاسیون، تخلیص آنزیم با کمک کروماتوگرافی تمایلی انجام شد. پس از تایید بیان با SDS-PAGE ، غلظت آنزیم بیان شده با روش برادفورد سنجش شد. در ادامه فعالیت آنزیم با روش رنگ سنجی در حضور و عدم حضور نانوذرات طلا بررسی و مقایسه گردید. نهایتا اثر نانوذرات طلا بر ساختار آنزیم کراتینیناز با روش طیف سنجی فلورسانس، بررسی گردید.
یافته ها: فعالیت آنزیم کراتینیناز در عدم حضور نانوذرات طلا U/ml ۶/۱۴ و در حضور نانوذرات طلا با غلظت های ۹۷/۱، ۹۴/۳، ۸۸/۷، ۸۲/۱۱، ۷۶/۱۵، ۷/۱۹و ۴/۳۹ نانوگرم بر لیتر به ترتیب U/ml ۱/۱۴، ۴/۱۲، ۲/۱۱، ۱/۱۰، ۴/۸، ۵/۷، ۷/۴ محاسبه گردید که نشان از کاهش فعالیت آنزیم کراتینیناز در حضور نانوذرات طلا دارد. از طرفی طیف سنجی فلورسانس آنزیم کراتینیناز در حضور و عدم حضور نانوذرات طلا در طول موج تهییج ۲۹۵ نانومتر کاهش شدت فلورسانس در حضور نانوذرات طلا را نشان داد.
نتیجه گیری: نانوذرات طلا باعث کاهش فعالیت آنزیم کراتینیناز شدند. همچنین نانوذرات طلا باعث کاهش شدت فلورسانس آنزیم کراتینیناز گردیدند که می تواند نشانگر تغییر در ریزمحیط اسیدآمینه تریپتوفان در ساختار آنزیم کراتینیناز باشد، در نتیجه استفاده از نانوذرات طلا گزینه مناسبی برای پایدارسازی فعالیت و ساختار آنزیم کراتینیناز جهت استفاده در کیت های تجاری نیستند.
کلیدواژه ها:
Creatininase ، Expression ، Gold nanoparticles ، Colorimetry ، Fluorescence spectroscopy ، Iau Science. ، کراتینیناز ، بیان ، نانوذرات طلا ، رنگ سنجی ، طیف سنجی فلورسانس Iau Science.
نویسندگان
شیرین جلیلی
Policing sciences and social studies research institute, Tehran. Iran.
فرشته رحمتی
Department of Biochemistry, Faculty of Biological Sciences, North-Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran.
مهدی عبداله زاده پارسا
Department of Biochemistry, Faculty of Biological Sciences, North-Tehran Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran.
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :