تاثیر تیمار متیل جاسمونات بر القای بیان ژن آنزیم ۱۰ - دی استیل باکاتین III ۱۰- ول استیل ترانسفراز DBAT درگیر در بیوسنتز باکاتین III در کشت های سلولی گیاه سرخدار Taxus baccata

سرطان یکی از کشنده ترین بیماری ها در دنیای مدرن است و اولین یا دومین عامل مرگ و میر در اکثر کشورهای جهان است. گیاهان دارای متابولیت های مفید، گیاهان دارویی نامیده می شوند که قابلیت درمان بیماری ها را دارند Taxus spp. از منابع اصلی تولید کننده پاکلیتاکسل با فعالیت ضد سرطانی است T. baccata یک بازدانه همیشه سبز است که به طور طبیعی در شمال ایران می روید. استخراج از درخت به دلایل رشد بسیار بطئی و محدودیت میزان پاکلیتاکسل تقریبا ۰/۰۳ -۰/۰۱% وزن خشک پوسته تخریب محیط زیست، پیچیدگی و هزینه بالا مقرون به صرفه نیست و برای تولید انبوه پاکلیتاکسل از کشت بافت استفاده میشود.مسیر بیوسنتز پاکلیتاکسل کاملا شناخته نشده است و توافق شده که به ۱۹ مرحله آنزیمی نیاز دارد. روش نیمه سنتزی شامل استخراج سطوح نسبتا بالایی از پیش ساز پاکلیتاکسل (باکاتین III و ۱۰- دی استیل باکاتین III) است که سپس با روش شیمیایی به پاکلیتاکسل تبدیل می شود. افزودن متیل جاسمونات به طور قابل توجهی تولید پاکلیتاکسل را در کشت سلول تحریک می کند. در پژوهش حاضر ریزنمونه های سرخدار ضدعفونی شد و در محیط B۵ کشت و متیل جاسمونات با غلظت μM ۱۰۰ روی کالوس های یک ماهه اسپری شد. سپس نمونه ها در دو زمان h۷ و h ۷۵ پس از اعمال تیمار فریز شدند. استخراج RNA بر پایه روش لیتیم کلراید بهینه سازی و RNA های با کیفیت جهت ساخت cDNA استفاده شد. سپس بررسی های بیانی توسط Real Time PCR انجام شد. نتایج داده های بیانی ژن DBAT شان داد که اثر تیمار متیل جاسمونات با غلظت μM ۱۰۰ ودوزمان h۷ , h۷۵ بر کالوس های گیاه سرخدار معنی دارشد. بیان ژن DBAT در زمان ۷h و ۷۵h از اعمال تیمار متیل جاسمونات به ترتیب ۱۰۷ و ۲۷ نسبت به شاهد افزایش یافت؛ مقدار بیان ژن DBAT با افزایش زمان از h۷ به h۷۵ کاهش یافت. ژن DBAT مسئول تولید باکاتین III در مسیر بیوسنتری پاکلیتاکسل است و افزایش تولید آن می تواند بر صنعت تولید نیمه سنتری پاکلیتاکسل اثر گذار باشد.