تولید و خالص سازی آنزیم پروتئاز قلیایی از باسیلوس قلیا دوست جدا شده از خاک

چکیده زمین ه و هدف: پروتئازها جزو مهم ترین آنزیم های صنعتی هستند پروتئازهای قلیایی در ترکیب شوینده ها استفاده می شوند. از آن جایی که مقاومت در برابر حرارت و محیط قلیایی دو خصوصیت مهم آنزیم ها به هنگام افزودن به ترکیب پاک کننده ها است لذا جستجو برای یافتن منابع آنزیمی و آنزیم های قلیایی دارای اهمیت بسیاری می باشد. هدف از انجام این مطالعه بررسی جداسازی باسیلوس قلیا دوست از خاک و امکان تولید آنزیم پروتئاز قلیایی از سوش جدا شده و خالص سازی آنزیم تولید شده بود. مواد و روش ها: عملیات جدا سازی و تخلیص باسیلوس قلیا دوست از نمونه های خاک با استفاده از کشت در محیط اختصاصی با هدف شناسایی فعالیت پروتئازی اولیه و سپس تخلیص سویه های دارای فعالیت پروتئازی انجام گردید. پس از آن گونه باسیلوس ۵-۲ در محیط مناسب با شرایط معین کشت داده شد. و خالص سازی آن از طریق: ۱- رسوب دهی فاز آنزیمی از طریق اشباع سازی با آمونیوم سولفات ۵۵%. ۲- تغلیظ توسط اولترافیلتراسیون ۳- کروماتوگرافی تعویض کاتیونی توسط رزین کربوکسی متیل سلولز صورت گرفت. در تمام مراحل فعالیت پروتئاز قلیایی از طریق هیدرولیز سوبسترای کازئین در۱۰ pH برای مدت زمان مشخص و سپس اندازه گیری محصول پروتئولیز(میزان معادل تیروزین) در طول موج ۲۷۵ نانومتر انجام می گرفت. یافته ها: با مقایسه خصوصیات بیوشیمیایی و تاکسونومیک ، باسیلوس ۵-۲ با باسیلوس آلکالوفیلیک تطابق داشت. هم چنین این سویه در pH های قلیایی دارای فعالیت پروتئولیتیک و آمیلولیتیک بود ولی فعالیت ژلاتینولیتیک نداشت. پیشرفت خالص سازی با روش الکتروفورز روی ژل پلی آکریل آمید ( PAGE ) بررسی و جرم ملکولی آنزیم با روش SDS-PAGE و با کمک استانداردهای پروتئینی معادل ۲۴۷۰۰ دالتون معین گردید. نتیجه گیری: پس از اتمام خالص سازی راندمان کل ۲۴% و مرتبه خالص سازی ۵۰ بار تعیین شد که راندمان خالص سازی نهایی به دست آمده مشابه راندمان به دست آمده در سایر تحقیقات بود. به نظر می رسد ملکول این آنزیم یک ملکول منومر باشد چون میزان تحرک الکتروفورتیک تک باند های به دست آمده در PAGE و SDS-PAGE مشابه یکدیگر بود. واژه های کلیدی: پروتئاز قلیایی، باسیلوس قلیا دوست، خالص سازی، فعالیت ویژه آنزیمی