طراحی و توسعه Dual-probe Real Time PCR جهت شناسایی کمی ویروس هپاتیت B

هپاتیت یک بیماری است که کبد را متورم کرده و فعالیت آن را مختل می سازد. اغلب از راه تزریق خون آلوده و فراورده های خونی آلوده منتقل می شود. با وجود در دسترس بودن واکسن جهانی، عفونت ویروس هپاتیت B تاثیر زیادی بر سلامت عمومی در سراسر جهان دارد و تشخیص دقیق و به موقع عفونت HBV مورد نیاز است. تحولات سریعی در روش های تشخیصی و پایش عفونت HBV، ازجمله روش های سرولوژی و مولکولی ایجاد شده است. آزمایش کیفی سطح آنتی ژن هپاتیت B (HBsAg) مدت طولانی است که به عنوان یک نشانگر تشخیصی برای افراد آلوده به HBV عمل می کند. اخیرا، از سطح HBsAg برای پیش بینی نتیجه درمان در اوایل درمان استفاده شده است. بااین حال، شناسایی موارد مثبت HBV DNA که HBsAg قابل تشخیص ندارند، استفاده از آزمایشات مولکولی را تشویق کرده است همچنین از سوی دیگر تشخیص کمی ویروس در روند درمان و دارویی بسیار موثر می باشد. ازاین رو، هدف ما از تحقیق طراحی و توسعه Dual-probe Real Time PCR جهت شناسایی کمی ویروس هپاتیت B بوده است. برای این مقاله ابتدا ۵ نمونه هپاتیت B از مراکز آزمایشگاهی تهیه و پرایمرها، پروب ها و کالیبراتور مناسب با رقت ۱۰۰،۱۰۰۰،۱۰۰۰۰ تهیه گردید و تکنیک Realtime-PCR با برنامه دمایی بهینه شده و مقادیر واکنش مناسب انجام شد و در نهایت نتایج بدست آمده از تحقیق ما با کیت مورد استفاده Genrproof در آزمایشگاه ها مقایسه گردید. نتایج حاصل از کار ما نشان داد که سیستم پرایمر و پروب طراحی شده با فرمت هیدرولیز کارایی خوب و مناسبی برای تشخیص کمی ویروس هپاتیت B دارد و همچنین طراحی و ساخت کالیبریتور و تبدیل عددی آن هم از صحت مناسبی برخوردار می باشد و می توان از این سیستم در شناسایی Viral Load در مراکز بالینی استفاده نمود.