روش سریع و موثر ترانسفورم سازی باکتری اشریشیاکلی

مقدمه و هدف: ترانسفورم سازی مولکولی سلول های باکتری، نقشی محوری را در روش های کلون سازی مولکولی ایفا می کند. در حال حاضر عمل ترانسفورم سازی به روش شیمیایی و یا به روش شوک الکتریکی (الکتروپوریشن) انجام می شود. درصد موفقیت این روش ها به میزان تجربه و دقت آزمایش کننده ارتباط دارد. بنابراین هر اندازه روش ترانسفورم سازی مولکولی کارایی و کیفیت بیش تری داشته باشد درصد میزان موفقیت آن روش افزایش خواهد یافت، هدف از تحقیق حاضر طراحی یک روش ساده و سریع برای ترانسفورم سازی مولکولی سلول های E.coli بود تا ضمن عدم نیاز به ابزارهای گران قیمت و اختصاصی واجد کارایی لازم نیز باشد.   مواد و روش ها: در روش ابدایی ما بعد از آماده سازی رسوب سلول باکتریایی، آن را با محلول جدیدی به نام ترانسفورم کننده سلول های مستعد ( Competent Transformation Solution) (CTS ) مخلوط، پس از اضافه کردن ۱ میکرولیتر DNA پلاسمیدی و انکوباسیون در دمای ۴ درجه سانتی گراد به مدت ۳۰-۵ دقیقه به آن گلوکز اضافه شده و در دمای ۳۷ درجه سانتی گراد انکوبه گردید، سپس عمل کشت سلول ها در پلیت انتخابی LB آگار حاوی ۱۰۰ میلی مولار کلسیم کلراید انجام شد تا پس از انکوباسیون ۱۸ ساعته کلنی های مربوط به سلول های ترانسفورم شده بر روی پلیت رشد یابند.   نتایج: در این روش مرحله شوک گرمایی حذف شد ضمن این که کارایی آن بیش تر از انواع روش های معمول محاسبه گردید (۱۰۷ سلول ترانسفورم شده در هر میکروگرم DNA پلاسمیدی).   نتیجه گیری: روش حاضر به عنوان یک روش ساده و راحت برای تهیه همزمان سلول های مستعد و ترانسفورم سازی معرفی می گردد.