تهیه آنتی بادی چند همسانه ای نوترکیب علیه ویروس لکه برگی کلروتیک سیب و بررسی کارایی آن
سال انتشار: 1402
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 76
فایل این مقاله در 13 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_GEB-12-1_006
تاریخ نمایه سازی: 29 مهر 1402
چکیده مقاله:
یکی از ویروسهای مهم آلوده کننده درختان میوه، ویروس لکه برگی کلروتیک سیب (Apple chlorotic leaf spot virus, ACLSV است. تهیه آنتیبادی و طراحی کیت الایزا و بیوسنسورها یکی از راهبردهای مفید در تشخیص زود هنگام عوامل بیماری زا در نمونههای با تعداد زیاد است. در همین راستا، تحقیق حاضر با هدف تولید آنتی بادی چندهمسانهای نوترکیب و طراحی کیت الایزا جهت ردیابی سریع ویروس لکه برگی کلروتیک سیب با استفاده از بیان در سیستم پروکاریوتی انجام شد. ابتدا، سازه pTG۱۹-ACLSV-CP به باکتریEscherichia coli سویه DH۵α منتقل و پس از تکثیر و استخراج پلاسمید نوترکیب، ژن پروتئین پوششی با استفاده از آنزیمهای برشی خارج و درون پلاسمید بیان pET۲۸(a) همسانه سازی گردید. سازه بیان pET۲۸-ACLSV-CP ساخته شده به منظور بیان پروتئین، به باکتری E. coli سویه BL۲۱(DE۳) منتقل شد. پس از بهینه سازی، بیان و استخراج پروتئین پوششی، نوار پروتئینی با اندازه تقریبی ۲۷ کیلودالتون چهار ساعت بعد از القاء مشاهده شد. سپس، پروتئین بیان شده به روش طبیعی با ستون Ni-NTA Agarose، خالص سازی انجام شد. پروتئین خالص شده، به عنوان آنتی ژن به خرگوش ماده نژاد نیوزیلندی طی چهار مرحله تزریق شد. ایمنوگلوبولینها با استفاده از کیت تخلیص IgG مبتنی بر پروتئین A از سرم خون به دست آمده از خرگوشهای ایمن شده تخلیص شدند. کارایی ایمنوگلوبولین های خالص شده، نشان داد که کاربرد غلظت ۱:۱۰۰۰ آنتی بادی نوترکیب تهیه شده و نشاندار برای ردیابی آنتی ژن های موردنظر مناسب هستند. نتایج حاکی از تولید آنتی بادی با اختصاصیت مناسب جهت ردیابی ویروس لکه برگی کلروتیک سیب و کارایی آنتی بادیها تولید شده برای شناسایی این ویروس برای غربال نهالها و باغات است.
کلیدواژه ها:
ACLSV ، Polyclonal antibody ، IgG ، ELISA. ، : لکه برگی کلروتیک سیب ، آنتی بادی چند همسانه ای ، ایمونوگلوبولین گاما ، الایزا.
نویسندگان
مریم افراشته
University of Zanjan
داود کولیوند
University of Zanjan
محمد حاجی زاده
Department of Plant Protection, Faculty of Agriculture, University of Kurdistan, Sanandaj, Iran
ناهید مسعودی
University of Guilan
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :