طراحی وکتور لنتی ویروسی pLEX-LAMP-DARPin جهت بیان دارپین هدفمند علیه HER۲ در سطح اگزوزوم
سال انتشار: 1396
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 52
فایل این مقاله در 12 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_JMUMS-27-151_002
تاریخ نمایه سازی: 2 آبان 1402
چکیده مقاله:
سابقه و هدف: سلول های زنده به منظور ارتباط با محیط اطرافشان نانوذرات اگزوزومی آزاد می کنند.امروزه اگزوزوم به عنوان حامل دارو در تحقیقات مطرح است. این ذرات را می توان با بیان لیگاند مخصوص سرطان/بیماری هدفمند ساخت. پروتئین اتصالی غشا LAMP که در اگزوزوم بیان می شود بهترین انتخاب به عنوان نگهدارنده لیگاندی است که می تواند به رسپتورهای اختصاصی سلول هدف متصل گردد. هدف از این مطالعه طراحی وکتور لنتی ویروسی بوده است که حامل ژن کایمر جهت بیان پروتئین کایمر LAMP-DARPin در سطح اگزوزوم برای اتصال به گیرنده های HER۲ در سطح سلول های سرطانی است.
مواد و روش ها: در این مطالعه تجربی با RNA استخراج شده از ماهیچه اسکلتی موش cDNA سنتز گردید وبا پرایمرهای اختصاصی، ژن LAMP۲b تکثیر گردید. با روش SOEing PCR دو سایت برش بین توالی کد کننده سیگنال پپتید وپپتید بالغ ایجاد شد وسپس در وکتور لنتی ویروسی pLEX کلون شد. ژن دارپین طراحی ،اپتیمایز ، سنتزودر وکتور pLEX-LAMP بین توالی سیگنال وپپتید بالغ کلون شد و کلونیگ با colony-PCR با تعیین توالی تایید شد.
یافته ها: ژل الکتروفورز محصول واکنش SOEing PCR، بیان گرتکثیر بخش کد کننده ژن LAMP۲b است. بعد از کلونیگ وجداسازی پلاسمید از کلون های مثبت ،تعیین توالی انجام شد که بلاست توالی در NCBI تایید کننده توالی ژن LAMP۲b است.هم چنین ورود توالی دارپین بین توالی پپتید سیگنال و پپتید بالغ به وسیله الکتروفورز وتوالی یابی تایید شد.
استنتاج: در این مطالعه وکتور لنتی ویروسی PLEX LAMP-DARPin طراحی گردید که با کمک آن می توان لیگاند دارپین را جهت هدفگیری سلول های سرطا نی HER۲ مثبت در سطح اگزوزوم بیان نمود.
کلیدواژه ها:
exosome ، lentiviral vector ، DARPins ، SOEing PCR ، LAMP۲b ، اگزوزوم ، وکتور لنتی ویروسی ، دارپین ، SOEing PCR ، LAMP۲b
نویسندگان
شعبانعلی خداشناس لیمونی
Assistant Professor, Immunogenetic Research Center, Mazandaran University of Medical Sciences, Sari, Iran
فاطمه سلیمی
PhD Student in Medical Biotechnology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
مهدی فروزنده مقدم
Associate Professor, Department of Medical Biotechnology, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :