Cloning of linear T-cell epitops of EG۹۵ antigen of Echinococcus granulosus into pGEX۴t۱ vector and expression analysis by SDS-PAGE

زمینه و هدف: انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس عامل بیماری مشترک بین انسان و دام به نام کیست هیداتیک یا هیداتیدوزیس است؛ موفق­ترین واکسن نوترکیب علیه این بیماری از کلون کردن ژن کد کننده آنتی­ژن ۲۵ کیلو دالتونی آن یعنی EG۹۵ در وکتور pGEX می­باشد که ایمنی سلولی و همورال قابل توجهی را در گوسفندان ایجاد کرده است اما با توجه به نقش ایمنی سلولی TH۱ در غلبه بر این بیماری و نقش اپی­توپ­های خطی در تحریک این نوع سیستم ایمنی جهت بهینه سازی شرایط واکسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالی کد کننده اپی­توپ­های خطی تحریک کننده لنفوسیت T این آنتی­ژن کلون و بیان شد. مواد و روش­ها: با استفاده از نرم افزار IEDB توالی کد کننده ی اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن EG۹۵ پیش­بینی و سنتز شد. تکثیر قطعه موردنظر با PCR انجام و بعد از هضم آنزیمی آن و وکتور pGEX۴T۱ با آنزیم xhoI، در وکتور با روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونی­های مثبت با روش colony PCR با استفاده از پرایمرهای مختلف انتخاب شده و بیان پروتئین نوترکیب در سلول BL۲۱ با ۱۰%SDS-PAGE موردبررسی قرار گرفت. نتایج: تکثیر توالی کد کننده اپی­توپ­های EG۹۵ با PCR انجام و قطعه موردنظر در وکتور pGEX۴T۱ کلون گردید. تایید پلاسمید نوترکیب با colony PCR و اختلاف اندازه وکتور طبیعی و نوترکیب صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب آنتی­ژن نیز به وضوح با SDS-PAGE مشخص شد. نتیجه­ گیری: قطعه EG۹۵ به طور موفقیت­آمیزی در وکتور pGEX۴T۱ کلون و در سلول BL۲۱ بیان شد.