همسانه سازی ژن SOX۲ انسانی در ناقل لنتی ویروسی و القای ژنی در سلول های HEK۲۹۳T

چکید ه   سابقه و هدف   ژن SOX۲ در میان گونه ها، حفاظت شده بوده و از فاکتورهای مهم در القای سلول های پیش ساز از سلول های تمایز یافته می باشد که موجب حفظ خاصیت پرتوانی سلول های پیش ساز می شود. SOX۲ ، OCT۴ ، cMYC و KLF۴ سبب باز برنامه نویسی سلول های سوماتیک به سلول های بنیادی می شوند. امروزه از ژن SOX۲ در جهت تولید سلول­های iPS و سلول درمانی استفاده می شود. در این تحقیق همسانه سازی ژن SOX۲ در ناقل لنتی ویروس و آلوده سازی سلول های HEK۲۹۳T بررسی شد.     مواد و روش ها   در یک مطالعه تجربی، توالی کدکننده ژن SOX۲ سنتز و در ناقل همسانه سازی pUC۵۷ دریافت گردید. ژن ساخته شده در ناقل بیانی لنتی ویروس pLEX-MCS ساب کلون شد. سازه نوترکیب توسط روش های PCR ، هضم آنزیمی و توالی یابی تایید شد. ذرات لنتی ویروس در سلول های تولید کننده HEK۲۹۳T تولید شدند. از وکتور لنتی ویروسی حاوی ژن GFP به عنوان کنترل استفاده شد. سلول های HEK۲۹۳T توسط ذرات ویروسی آلوده شده و به وسیله مقاومت به آنتی بیوتیک پورومایسین انتخاب گردیدند. بیان SOX۲ در سلول های HEK۲۹۳T توسط RT-PCR بررسی شد.   یافته ها   سازه نوترکیب بیان کننده SOX۲ ساخته و تایید گردید. سلول های HEK۲۹۳T توسط ذرات ویروس آلوده شدند و پس از ۲۴ ساعت، بیش از ۹۰% سلول های HEK۲۹۳T بیان GFP را از خود نشان دادند. با استفاده از روش RT-PCR بیان SOX۲ در سلول های HEK۲۹۳T تایید شد.   نتیجه گیری   سلول های HEK۲۹۳T با موفقیت سازه های نوترکیب را دریافت و ژن های GFP و SOX۲ را بیان نمودند.