شناسایی دقیق حذف های ناشناخته خوشه ژنی بتاگلوبین در ناقلین بتا تالاسمی با استفاده از دو روش Real-time PCR و MLPA

چکید ه   سابقه و هدف   بتا تالاسمی به طور عمده از جهش های نقطه ای یا حذف های کوچک ناشی می شود ولی مواردی از وجود حذف های بزرگ در خوشه ژنی بتاگلوبین مشاهده شده است. شناسایی حذف های شناخته شده مبتنی بر روش Gap PCR می باشد در حالی که حذف های ناشناخته با این روش شناسایی نمی شوند. برای فایق آمدن بر این محدودیت، دو روش کمی Real-time PCR و MLPA برای بررسی کمی خوشه ژنی بتاگلوبین به کار گرفته شد.   مواد وروش ها   در این مطالعه که به صورت مورد - شاهدی انجام شد، به روش سرشماری ۴۰ فرد ناقل مشکوک به حذف در خوشه ژنی بتاگلوبین که دارای شاخص های خونی کاهش یافته( pg ۲۷ MCH < ، fl ۸۰ < MCV )، هموگلوبین A۲ نرمال و هموگلوبین F افزایش یافته یا نرمال بودند وارد مطالعه شدند. تعداد نسخه های ژنی با به کارگیری روش Real-time PCR و روش مقایسه ای چرخه آستانه، مورد بررسی قرار گرفت. هم چنین تعداد نسخه های ژنی با روش MLPA نیز ارزیابی شد.   یافته ها   نتایج حاصل از Real-time PCR برای ژن های HBB ، HBD و HBG۲ با استفاده از روش بررسی مقایسه ای چرخه آستانه، میزان – ΔΔ Ct ۲ را برای افراد سالم، ۱۸/۰ ± ۹۶/۰ و برای ناقلین حذف در خوشه ژنی بتاگلوبین، ۰۴/۰ ± ۵۸/۰ نشان داد. هم چنین نتایج حاصل از MLPA ، کاهش حدود ۵۰% در ارتفاع پیک شناساگرهای تکثیر یافته مرتبط با ژن حذف شده در افراد هتروزیگوت را نشان داد.   نتیجه گیری   نتایج MLPA و بررسی پیک های حاصل از تکثیر شناساگر، وجود حذف را در مناطقی که توسط Real-time PCR شناسایی شده بود، تایید کرد. با کمک این دو روش می توان حذف های شناخته شده و ناشناخته را در ناقلین بتا تالاسمی با دقت زیاد شناسایی نمود.   کلمات کلیدی : بتا تالاسمی، بتاگلوبین، حذف ژنی