High-level Expression of Tetanus Toxin Fragment C in Escherichia coli
محل انتشار: مجله آرشیو رازی، دوره: 73، شماره: 1
سال انتشار: 1397
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: انگلیسی
مشاهده: 28
فایل این مقاله در 12 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_ARCHRAZI-73-1_004
تاریخ نمایه سازی: 6 دی 1402
چکیده مقاله:
Fragment C is the C-terminal domain of the heavy chain of tetanus toxin that can promote the immune response against the lethal dose of this toxin. Therefore, this portion can be considered as a candidate vaccine against tetanus infection, which occurs by Clostridium tetani. The present study aimed to compare the expression of tetanus toxin fragment C in Escherichia coli BL۲۱ (DE۳) pLysS cells having a high tolerance to toxins between two different expression vectors, namely pET۲۲b and pET۲۸a, using the sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis and western blot analyses. After DNA extraction from Harvard CN۴۹۲۰۵ strain of C. tetani, the gene of interest was amplified using polymerase chain reaction, and then sequenced and cloned into the expression vectors of pET۲۲b and pET۲۸a, transformed into competent BL۲۱ (DE۳) pLysS cells, and finally expressed using an optimized protocol. The cells were induced with isopropyl β-D-۱-thiogalactopyranoside (IPTG) at four different incubation temperatures (i.e., ۳۷, ۳۳, ۳۰, and ۲۵ °C) and three different incubation times (i.e., ۱, ۲, and ۳ h). Although the SDS-PAGE and western blot analyses confirmed the expression of the recombinant fragment C (r-fragment C) ligated into both of the expression vectors, pET۲۸a showed a higher r-fragment C expression level than the other vector (۳۸.۶۶ mg/L versus ۳۲.۳۳ mg/L, P<۰.۰۵). An optimal expression condition was acquired ۳ h after ۱ mM IPTG induction at ۲۵ °C. The results demonstrated that E. coli BL۲۱ (DE۳) pLysS as an expression host in combination with pET-۲۸a as an expression vector was a more compatible expression system to express the fragment C of tetanus toxin, compared to E. coli BL۲۱ (DE۳) pLysS/pET-۲۲b expression system. Overall, these results may represent an opportunity to improve the expression system for the production of tetanus toxin vaccine using recombinant protein strategy.
کلیدواژه ها:
Clostridium tetani ، Fragment C ، pET۲۲b expression vector ، pET۲۸a expression vector ، E. coli BL۲۱ (DE۳) pLysS
نویسندگان
K. Aghaiypour
Department of Genomics and Genetic Engineering, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education, and Extension Organization, Karaj, Iran
R. Teymourpour
Department of Genomics and Genetic Engineering, Razi Vaccine and Serum Research Institute, Agricultural Research, Education, and Extension Organization, Karaj, Iran
مراجع و منابع این مقاله:
لیست زیر مراجع و منابع استفاده شده در این مقاله را نمایش می دهد. این مراجع به صورت کاملا ماشینی و بر اساس هوش مصنوعی استخراج شده اند و لذا ممکن است دارای اشکالاتی باشند که به مرور زمان دقت استخراج این محتوا افزایش می یابد. مراجعی که مقالات مربوط به آنها در سیویلیکا نمایه شده و پیدا شده اند، به خود مقاله لینک شده اند :