شناسائی هندوانه به عنوان میزبان طبیعی جدید ویروس کوتولگی سبزرد نخود ایرانی در ایران

در سال های اخیر، خسارت ویروس کوتولگی سبزرد نخود ایرانی (chickpea chlorotic dwarf virus, CpCDV، از جنس Mastrevirus و خانواده Geminiviridae) در تعداد زیادی از گیاهان مانند هندوانه، بامیه و پنبه شدت گرفته و این ویروس از نقاط مختلف دنیا گزارش شده است (Kanakala and Kuria ۲۰۱۸). در تحقیق حاضر، آلودگی طبیعی هندوانه به CpCDV در مزارع مورد بررسی قرار گرفت. در سال ۱۳۹۷، ده نمونه هندوانه با علائم سبزردی برگ ها، سفتی، تغییر رنگ با ایجاد رگه های سفید در داخل میوه، عدم تقارن و افزایش بذرهای عقیم در میوه (شکل ۱) از مزارع آلوده هندوانه در بهبهان (استان خوزستان) جمع آوری شدند. دی ان ای کل نمونه ها به روش cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) از بافت برگ استخراج گردید و مولکول های دی ان ای حلقوی موجود در آن ها به روش تکثیر دایره غلتان (rolling circle amplification, RCA) با استفاده از آنزیم فی ۲۹ دی ان ای پلی مراز (TempliPhi, GE Healthcare, USA) غنی سازی گردید. از محصول RCA حاصل به عنوان رشته الگو به همراه جفت آغازگر CpCDV-۷۵۲-F/CpCDV-۱۳۲۶-R (Askari et al. ۲۰۲۱) در آزمون واکنش زنجیره ای پلی مراز استفاده گردید. این آزمون، منجر به تکثیر قطعه قابل انتظار به اندازه ۵۷۵ جفت باز برای هر ده نمونه گردید (شکل ۲) که آلودگی نمونه ها به CpCDV را اثبات نمود. تعیین ترادف نوکلوتیدی محصول واکنش زنجیره ای پلی مراز مربوط به نمونه W۱، آلودگی قطعی آن را به CpCDV تایید نمود.