استفاده از پلتفرم سوسپانسیون سلول های گیاهی BY-۲ برای تولید آنزیم بتا-۱و۳ گلوکاناز

به دلیل افزایش تقاضا برای محصولات عاری از فرآورده های حیوانی، سلول های گیاهی به عنوان یک پلتفرم مناسب برای تولید پروتئین های نوترکیب مورد توجه می باشند. نگهداری ارزان، ساده بودن جداسازی و خالص سازی محصول تولید شده و کشت مستقل از شرایط آب و هوایی، کیفیت خاک، فصل ها، طول روز و وضع هوا از مزیت های استفاده از سوسپانسیون های سلولی می باشد. در این تحقیق از سلول های گیاهی BY-۲  استفاده شد که علاوه بر مزیت های فوق سرعت تقسیم بالای سلولی از ویژگی های مهم سلول های BY-۲ است. ابتدا به منظور بهینه سازی انتقال و بیان ژن در سلول های BY-۲، ژن گزارشگر gus  به این سلول ها منتقل شد. بیان این ژن منجر به فنوتیپ قابل سنجش می شود. برای اثبات حضور ژنgus  در سلول های BY-۲، قطعه bp۵۲۱ مورد انتظار با استفاده از PCR مشاهده شد. جهت تایید بیشتر در سنجش بیوشیمیایی GUS در سلول های  BY-۲تراریخته، آبی شدن سلول ها مشاهده شد. جهت بیان  آنزیم بتا-۱و۳ گلوکاناز،  ژن bgnI حاوی اینترون از جدایه قارچ T. virens در وکتور دوگانه pBI۱۲۱GUS-  همسانه سازی و سازه بدست آمده به سلول های BY-۲ جهت بیان پروتئین منتقل شد. بررسی بیان آنزیم بتا ۱و۳ گلوکاناز در سلول های تراریخته، با استفاده از الگوی پروتئینی توسطSDS-PAGE  انجام گرفته و بیان آنزیم مورد نظر در سلول هایBY-۲  مورد تایید قرار گرفت. برای تعیین فعالیت آنزیم بتا-۱و۳ گلوکاناز (BgnI) از روش دی نیترو سالسیلیک اسید (DNS)، جهت اندازه گیری مقدار قند های احیا شده حاصل از عمل این آنزیم استفاده شد. نتایج بدست آمده نشان داد که سلول های BY-۲ تراریخته قادر به بیان آنزیم بتا ۱و۳ گلوکاناز فعال که دارای فعالیت آنزیمی هستند می باشد.