کلونینگ و توالی یابی ژن هیوسیامین 6-بتا هیدروکسیلاز گیاه Hyoscyamus senecionis

د Hyoscyamus senecionis از گیاهان دارویی کمتر شناخته شده بومی فلات ایران بوده که حاوی مقادیر قابل توجهی اسکوپولامین به عنوان متابولیت دارویی ارزشمند میباشد. هیوسیامین 6-بتا هیدروکسیلاز H6H مسئولیت کلیدی اپوکسیداسیون و تبدیل هیوسیامین به اسکوپولامین را در دو مرحله متوالی آخر مسیر آلکالوئیدهای تروپانی به عهده دارد. در این مطالعه cDNA کد کننده h6h با استفاده از پرایمرهای اختصاصی طراحی شده بر اساس نواحی حفاظت شده اطراف ژن، تکثیر گردید. کلونینگ قطعه حاصله با استفاده از روش T/A کلونینگ در اشرشیاکلی نژاد DH5α انجام و حضور آن در باکتری با استفاده از کلونی PCR و هضم آنزیمی تایید گردید. نتایج توالی یابی حاکی از ORF جدید هیوسیامین - 6-بتا- هیدروکسیلاز به طول 1035 جفت باز، کد کننده پروتئینی با 344 اسید آمینه بود. آنالیز توالی نوکلئوتیدی این ژن تشابه زیاد آن را با ژن h6h سایر گیاهان مانند (%95) Brugmansia candida ،(%96) H. niger همچنین Scopolia parviflora% 91 نشان داد. آنالیز شجره فیلوژنی این ژن حاکی از فاصله تکاملی کم آن با h6h متعلق به H. niger و B. candida بود، در حالی که بیشترین فاصله را گونه Anisodus tanguticus داشت.