بررسی تنوع آللی ژن BoLA-DRB3 با استفاده از آنزیم برشی RsaI در گاومیش های بومی خوزستان

جایگاه ژنی مجموعه سازگاری بافتی (MHC) کد کننده آنتی ژنها و پروتئینهای سطح لوکوسیت ها می باشند ه در واکنش دفاعی بدن و شناسایی پروتئینهای خارجی نقش دارند. در گاو این جایگاه ژنی به نام بولا معروف می باشد که در سه دسته ژنی به نامهای کلاس I، کلاس II و کلاس III بر روی بازوی کوتاه کروموزوم 23 گام ترتیب یافته اند. هر یک از این کلاسهای ژنی دارای مجموعه لوکاسهای متعد و مختلف است و هر لوکاس می تواند تا بیش از دهها آلل را شامل شود. هدف از این تحقیق، بررسی پلی مرفیسم اگزون 2 جایگاه ژنی BoLA-DRB3 در جمعیت گاومیش استان خوزستان می باشد. در این مطالعه از روش پی سی آر دو مرحله ای (Heminested-PCR) برای تکثیر این اگزون استفاده شد. خونگیری از 80 رأس گاومیش از سطح استان صورت گرفت. دی. ان. ای از خون کامل استخراج شد. واکنش دو مرحله ای زنجیره ای پلیمراز جهت تکثیر قطعه 284 جفت بازی از اگزون 2 ژن MHC با استفاده از پرایمرهای اختصاصی این ژن انجام شد. قطعه تکثیر شده به وسیله آنزیم RsaI مورد هضم قرار گرفت. محصولات هضم شده توسط الکتروفورز عمودی بر روی ژل پلی آکریل آمید 8% با استفاده از نیترات نقره رنگ آمیز و تفکیک شدند. نتایج حاصل از این مطالعه با استفاده از آنزیم برشی RsaI تعداد ده الگوی برشی را نشان داد که الگوهای برشی g و b به ترتیب با فراوانی 30 و 20 درصد بیشترین فراوانی آللی را به خود اختصاص دادند با استفاده از این آنزیم 17 ترکیب ژنتیکی شناسایی شد. نتایج آزمون کای مربع نشان داد که ج معیت مورد بررسی، در حالت تعادل هاردی- وینبرگ قرار دارد. در این مطالعه سطح بسیار بالایی از پلی مورفیسم مشاهده شد.