بیان موقت آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B در برگهای توتون و اسفناج به روش اگرو اینفیلتراسیون

هپاتیت ویروسی یکی از بیماری های عفونی شایع در میان مردم جهان است که در حدود 5درصد از جمعیت جهان ناقل مزمن این بیماری می باشند. آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B به دلیل قدرت ایمنی زایی بالا، موثرترین پروتئین برای ساخت واکسن میباشد. تهیه واکسن هپاتیت B از مخمر وسلولها پستانداران پر هزینه می باشد و با توجه به اهمیت و مقبولیت فناوری جدید تولید پروتئین های نوترکیب مانند واکسن ها، پادتن ها و داروها در گیاهان , تولید پروتئین نوترکیب HBS Ag بسیار مورد توجه قرار دارد. در این پروژه بیان موقت آنتی ژن سطحی هپاتیت B به روش اگرواینفیلتراسیون یا انتقال ژن تحت خلاء توسط اگروباکتریوم برای تولید این پروتئین نوترکیب در گیاه اسفناج استفاده شد. آنتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B در وکتور گیاهی pBI 121 تحت پروموتور pCAMV 35S و ترمیناتور Nos کلون شد. پلاسمید نوترکیب pBI 121 با روش ذوب - انجماد به Agrobactrium tumefacienes سویه GV3850 منتقل شد. با استفاده از روش اگرواینفیلتراسیون بیان اختصاصی انتی ژن سطحی ویروس هپاتیت B در برگ های اسفناج مورد بررسی قرار گرفت ، بیان موقت پروتئین را سه تا هفت روز بغد از نفوذ می توان تشخیص داد RNA. و پروتئین استخراج شده از برگ های آلوده گیاه توتون و اسفنا ج با استفاده از واکنش های زنجیره ای پلیمراز( PCR) ولکه گذاری پروتئین وروش های مختلف هضم انزیمی مورد بررسی قرار گرفت .میزان بیان پروتئین نوترکیب به روش ازمایشگاهی بیوشیمیایی الایزا با کیت HBs Ag Biolisa اندازه گیری شد که در حدود 1/2 و1/1% کل پروتئین محلول گیاه می باشد .این بررسی حاکی است که گیاه اسفناج وتوتون می تواند به عنوان میزبان تولید پروتئین های نوترکیب، در ساخت واکسن ها به کار رود. این روش بدون نیاز به تجهیزات پیشرفته قابل انجام و از نظر اقتصادی مقرون به صرفه است.