استخراج RNAاز سلولهای بیوفیلم استرپتوکوکوس موتانس

استخراج RNAبا کمیت و کیفیت مناسب جهتreverse transcriptas PCRهیبریدیزاسیون در نورترن بلاتینگ و آنالیز بیان ژن باReal Time PCRاز اهمیت بسیاری برخوردار است. در بیوفیلم استرپتوکوکوس موتانس پلیساکاریدهای خارج سلولی محلول و غیر محلول تولید شده مانع استخراجRNAلذا، بدون کاربرد روش مناسب برای حذف این پلیساکاریدهاروشهای مولکولی مبتنی بر RNA برای این باکتری ها مقدور نیست. هدف از این مطالعه استخراج RNA ازسلولهای بیوفیلم استرپتوکوکوس موتانس بود روش بررسی : برای استخراجRNAاز سلولهای تشکیل دهنده بیوفیلم، استرپتوکوکوس موتانس ATCC35668و یک سویه استرپتوکوکوس موتانس جداسازی شده از پلاک دندانی استفاده شد . پس از تشکیل بیوفیلم در پلیت هایمیکروتیتر پلی استیرنی ۲خانهای ستخراجRNAبا ۳ روش انجام شد . ۱ : روش معمول استخراجRNAاز سلول های پلانکتونیک با محلولRNX-Plus (سیناژن). ۲: کیت و دستگاهHYBAID Ribolyser و لولههای حاوی انواع دانه های شیشه ای پلاستیکی و سرامیکی به منظورلیز بهتر سلولها. ۳: تلفیقی از دو روش محلولRNX-PlusدستگاهHYBAID Rybolyserولولههای حاوی انواع د انه . میانگین نسبت جذب نوری در260/280 نانومترهرروش بانرم افزار eXEL و براورد فاصله اطمینان توافقی ازخطای استاندراد مقایسه شد فناوریهای مناسب در حذف پلی ساکاریدها و ایجاد حداکثر لیز سلولی موثر تر از روشهای معمول استخراجRNA از سلولهای بیوفیلم است. اما، استفاده از دستگاه و محلول تجاری RNX plusروش سوم) به دلیل استفاده از محلول های ارزان تر و قابل دسترس مناسبتر است