بهینهسازی کدونی و کلونسازی ژن فاکتور رشداکتیوین Aانسانی

اکتیوینAیکی از اعضای ابر خانواده فاکتورهای رشد تغییر شکل دهنده بتا(TGF-β) است که تولید آن به دلیل ایفای نقش در تنظیم متابولیسم استخوان، تنظیم هورمونها، سرطان، ترمیم زخم و تمایز از اهمیت بالایی برخوردار است. از آن جاییکه استخراج این پروتئین ازمنابع طبیعی آن کار پرهزینه و با کارایی پایینی است لذا تولید نوترکیب آن با استفاده از باکتریE.coliبه عنوان اولین و پرکاربردترین میزبان در تولید پروتئین های نوترکیب از اهداف اساسی این تحقیق می باشد ابتداcDNAژن اکتیوین Aانسانی ازپایگاه NCBI استخراج و بااستفاده ازبرنامه Rare Codon Analysisکدونهای آن با کدونهای ارجح در باکتریE.coliجایگزین شدند. از آن جایی که پروتئین اکتیوینA دارای پیوند دیسولفیدی در ساختار خود میباشد، به منظور بیان صحیح آن از سیگنال پپتید آنزیم آلفا آمیلازB.licheniformisکه میتواند پروتئین مورد نظر را به فضای پریپلاسمی هدایت کند، استفادهشد. جهت اطمینان ازعدم تشکیل ساختارهای حلقه مانند درmRNAحاصله، از برنامه نرمافزاریRNA Structureو به منظور بررسی توالی و پیش بینی مکان برش پپتید نشانه و نیز ارزش ترشحی آن از برنامههایSignalP و Gene runnerاستفاده گردید.