همسانه سازی توام ژن های دفنسین و کیتیناز کایمری در سازه بیانی گیاهی

بیماری های قارچی از جمله عوامل مهمی هستند که کشت و توسعه گیاهان مختلف در سراسر دنیا را مورد تهدید قرار می دهند. استفاده از روش های نوین فناوری زیستی و مهندسی ژنتیک قادر است با انتقال هدفمند ژن های مفید و خاص به گیاهان، آنها را در برابر طیف وسیعی از قارچ های بیماریزا مقاوم گرداند. هدف از این تحقیق ساخت سازه بیانی شامل cDNA ژن دفنسین جدا شده از گیاه تربچه cDNA و (Raphanus sativus)ژن کیتیناز 42 جدا شده از قارچTrichoderma atrovirideبه همراه دمین اتصال به کیتین با منشا باکتری Serratia marsescense می باشد که در صورت انتقال توام دو ژن، قادر خواهد بود با از بین بردن همزمان غشای پلاسمایی و کیتین دیواره سلولی قارچ مهاجم، گیاه را در برابر آن مقاوم سازد. بدین منظور در ابتداcDNAژن دفنسین در ناقل بیانیpBI121 به جای ژن gusتحت کنترل پیشبرCaMV 35Sو عوامل ختم رونویسیNOSقرار داده شد. در مرحله بعد کاست کامل بیانی ژن کیتینازکایمری شامل پیشبر cDNAژن کیتینازکایمری و عوامل ختم رونویسیکه قبلا در سازهpJETMZ1 همسانه سازی شده بود، در پائین دست کاست بیانی ژن دفنسین در جایگاه شناسایی آنزیمEcoRI قرار گرفت. در نهایت حضور توام و مستقیم هردوژن توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز وهضم آنزیمی مورد تائید واقع شدند. از سازه ساخته شده در این تحقیق می توان جهت انتقال ژن های مذکور به گیاهان مختلف جهت تولید گیاهان تراریخته مقاوم در برابر قارچ های بیماری زا استفاده کرد