کلونینگ و بررسی بیان ژن کد کننده BMP-2 انسانی در باکتری E.coli به منظور تولید یک داروی نوترکیب
محل انتشار: مجله پزشکی بالینی ابن سینا، دوره: 21، شماره: 3
سال انتشار: 1393
نوع سند: مقاله ژورنالی
زبان: فارسی
مشاهده: 905
فایل این مقاله در 7 صفحه با فرمت PDF قابل دریافت می باشد
- صدور گواهی نمایه سازی
- من نویسنده این مقاله هستم
استخراج به نرم افزارهای پژوهشی:
شناسه ملی سند علمی:
JR_SJH-21-3_004
تاریخ نمایه سازی: 7 اسفند 1395
چکیده مقاله:
مقدمه و هدف: پروتئین های مورفوژنتیک استخوانی، گروهی از سایتوکاین های متعلق به ابرخانواده TGFβ می باشند. اینپروتئین ها در تکامل بسیاری از ارگان ها و بافت ها، طی دوران جنینی و پس از آن در ترمیم و بازسازی بافت های استخوان و غضروف، نقش دارند. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بررسی بیان این پروتئین در باکتری E.Coli می باشد. روش کار: در این مطالعه تجربی توالی cDNA مربوط به پپتید بالغ پروتئین مورفوژنتیک انسانی 2 (BMP-2) در باکتری E.Coli کلون شد. پلاسمید نوترکیب ET28a/BMP-2 پس از توالی یابی به باکتری بیانی (E.coli BL21(DE3 ترانسفرم گردید. باکتری نوترکیب در محیط LB مایع حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین در دمای 37˚C کشت داده شد. القا با IPTG صورت گرفت. بررسی بیان به کمک RT-PCR و SDS-PAGE و تأیید بیان با وسترنبلاتینگ انجام شد. نتایج: توالی ژنی به کمک PCR تک ثیر یافت . بعد از آماده سازی ژن و پلاسمید، واکنش اتصال صورت گرفت . توالی یابی، صحت کلونینگ را نشان داد. بررسی بیان با RT-PCR و SDS-PAGE نشاندهنده بیان پروتئین بود. وسترن بلاتینگ نتایج را تأیید کرد. نتیجه نهایی: بیان بالای پروتئین نوترکیب در سیستم پروکاریوتی حاصل شد. استفاده از غلظتهای متفاوت القا کننده در ساعت های مختلف نشان داد که 4 ساعت بعد از القا با غلظت 1mM از IPTG بیشترین بیان را داریم.
کلیدواژه ها:
نویسندگان
نژاد محمدی
کارشناسی ارشد زیست فناوری پزشکی دانشگاه علوم پزشکی همدان
جمشید کریمی
استادیار گروه بیوشیمی دانشکده پزشکی دانشگاه علوم پزشکی همدان
نوشین شباب
کارشناس آزمایشگاه بیولوژی مولکولی دانشگاه علوم پزشکی همدان
سمانه نادری
کارشناسی ارشد زیست فناوری پزشکی دانشگاه علوم پزشکی همدان