ردیابی و شناسایی نژاد PVYNTN در مزارع سیب زمینی استان خراسان رضوی

نژاد PVYNTN باعث ایجاد بیماری لکه حلقوی نکروتیک غده سیب زمینی (PTNRD) می شود. این نژاد زیر گروه نژاد نکروز رگبرگ توتون PVYN و حاصل نوترکیبی بین نژادهای PVYN و PVYO می باشد که اغلب در زمان برداشت بدون علایم و غیر قابل شناسایی بصورت چشمی است. معمولا علایم در زمان پس از برداشت در شرایط انبار نمایان می شوند و باعث کاهش کیفیت غده ها و قابلیت عرضه در بازار می شود. واکنش زنجیره ای پلیمراز نسخه برداری معکوس، (RT-PCR) ابزاری دقیق و قابل اعتماد برای تمایز و شناسایی نژاد PVYNTN در تایید علایم و ردیابی آلودگی در بافتهای بدون علایم محسوب می شود. به همین منظور در تابستان 1386تعداد 435نمونه از غده های مزارع استان خراسان رضوی به صورت تصادفی جمع آوری شد. غده ها بعد از گذراندن دوره خواب در دمایC ˚4، به گلخانه در دمایC ˚ 25جهت جوانه زنی منتقل شدند سپس جوانه های هر غده با آزمونDAS- ELISA به کمک پادتن چند همسانه ای برای ردیابی ویروسY سیب زمینی مورد بررسی قرار گرفتند. با توجه به نتایج حاصل از آزمون الیزا نمونه های دارای بیشترین میزان جذب در طول موج 405نانومتر انتخاب و در نهایت مشخص گردید که 53نمونه به PVY آلوده بودند. سپس با استفاده از محلول RNX™(-PLUS)تودهRNA کل 40گیاه آلوده به PVY استخراج و با کمک دوجفت آغازگر اختصاصی طراحی شده برای ناحیه ژن پروتیین پوششیCP، CDNA مربوطه ساخته و برای انجام آزمون RT-PCR مورد استفاده قرار گرفت. نمونه های آلوده به PVY به همراه آغازگرهای MOR2 و MOR3در محدودهٔ569-BP و جدایه های متعلق به نژاد PVYNTN به همراه آغازگرهای MOR1 وMOR2 درمحدوده 334-BP ایجاد باند نمودند.