آنالیز کمی ژن HA ویروس آنفولانزای انسانی H1N1 با استفاده از روش PCR

بیماری آنفولانزا یکی از بیماریهای کشنده در انسان و پرندگان می باشد که به چندین همه گیری منجر به مرگ و میر بالا انجامیده است . آنتی ژن نورآمین ایداز ) NA ( و آنتی ژن هماگلوتینین ) HA ( مهم ترین زوجهای آنتی ژنهای سطحی ویروس هستند ، چراکه آنها مشمول نوترکیبی و تغییرات در طی تحولات ویروس می باشند . این تحولات سبب چندین اپیدمی و پاندمی ویروس آنفولانزا تا جایی که امکان دارد ، می شود . یکی از راه های ارزیابی سرعت ویروس آنفولانزا ، آنالیز کمی ژن HA ویروس آنفولانزا بوسیله متد زمان واقعی Real Time PCR( PCR ( می باشد . در این مطالعه آنالیز کمی ژن HA ویروس آنفولانزای انسانی H1N1 توسط متد زمان واقعی PCR بهینه سازی گردید . PCR با استفاده از پرایمرهای طراحی شده برای قطعه ژن HA انجام شد . قطعه ژن HA به بردار PTG-19 قرار داده شد و شبیه سازی با استفاده از روش تعیین توالی و هضم توسط آنزیم BamH1 تایید شد . پلاسمید حاوی ژن HA در رقت یک دهم تهیه شده و PCR کمی بر اساس سایبرگرین ) SYBR Green ( برای آنها انجام شد . پلاسمید حاوی ژن HA ایجاد گردید و در توالی سنجش ژن و هضم آنزیمی HA تایید شده و توسط روش Real Time PCR بر اساس سایبرگرین در رقت های مختلف انجام شد ؛ تفاوت CT بین دو رقت ارزیابی در حدود 3.5 بود . حساسیت از روش بهینه سازی شده ، 170 عدد کپی از DNA در هر واکنش بود . با بهینه سازی تجزیه و تحلیل کمی از انکوژن HA توسط روش Real Time PCR بر اساس سایبرگرین ، شرایطی پدید آمد که امکان ارزیابی بیان ژن HA در نمونه های بالینی و بنابراین در کشتهای سلولی تحت درمان با داروهای کاندیدویروس آنفولانزا حادث گردید