استحصال سم شبه شیگا از باکتری E. coli O157 :H7

سابقه و هدف:آلودگی انسان با اشرشیا کلای انتروهموراژیک (EHEC) میتواند منجر به اسهال آبکی، خونی یا سندرم اورمی همولایتیک (HUS) گردد. این سندرم در 5 تا 10 درصد از مبتلایان به E. coli O157 :H7 پدید میآید. کودکان کمتر از 5 سال، سالمندان و افراد دچار نقص سیستم ایمنی مستعدترین افراد برای عوارض سخت ناشی از این پاتوژن می باشند. ورود این باکتری که توانایی مولد توکسین شبه شیگا (Stx) را دارد باعث ایجاد علایم گوارشی از جمله اسهال و ورم مخاط روده می شود. این توکسین یک پروتیین هگزامر با وزن مولکولی 70/5 کیلو دالتون بوده و از زیر واحدهای A و B تشکیل شده است. هدف از این تحقیق تخلیص پروتیین Stx می باشد که از آن می توان در تهیه کیت تشخیصی، تولید آنتی بادی اختصاصی و مطالعات مربوط به واکسن استفاده کرد.مواد و روش ها: به این منظور ابتدا باکتری E. coli O157:H7 به وسیله ی تکنیک PCR تایید گردیده و در محیط LB کشت داده شد. پس از سانتریفیوژ، دیواره سلولی باکتری توسط دستگاه سونیکاتور تخریب شد. از آنجا که سم هم به صورت ترشحی در محیط کشت و هم در داخل باکتری قرار دارد، برای افزایش میزان غلظت پروتیین، رسوب و محلول رویی با هم مخلوط و پس از لیوفلیز و ترسیب با نمک آمونیوم سولفات، علیه آن نمک در بافر PBS دیالیز شد.نتایج: حضور پروتیین به وسیله ی تکنیک های SDS-PAGE و وسترن بلات تایید گردید. به منظور تایید سمیت پروتیین، محلول رویی، رسوب لیز شده و مخلوطی از هر دو به گروه های موش سوری تزریق شدند.نتیجه گیری: در این آزمایش بازدهی تولید توکسین 650 میکروگرم بر میلی لیتر از حجم یک لیتر کشت و خلوص نهایی 90 درصد بوده است.