ساخت سازهی ژنی برای انتقال به مخمر به منظور تجزیه سلولز

سلولز اصلی ترین پلیساکارید دیواره ی سلولی گیاهان است که از واحدهای -D-βگلوکوپیرانوز با پیوندهای 1-βو-4 گلیکوزیدی تشکیل شده است. تجزیه ی سلولز نیازمند همکاری سه نوع آنزیم شامل سلولاز اندوگلوکونازها، اگزوگلوکانازها و -βگلوکوزیدازها میباشد. باکتری Thermobifidia fusca به عنوان تولید کنندهی آنزیم های سلولاز میباشد و ژن Cel6B در این باکتری به عنوان یک اگزوسلولاز در تجزیه ی سلولز نقش دارد. در این پژوهش به منظور تجزیهی سلولز و تولید اتانول در شرایط بی هوازی با مخمر Pichia pastoris ابتدا ژن سلوبیوهیدرولاز باکتری Thermobifiad fusca که روی پلاسمید PSZ143 بود با طراحی آغازگرهای مناسب به وسیله ی روش PCR تکثیر شد و پس از هضم پلاسمید مخمری Phil-S1، قطعهی 1680 bp ژن Cel6B در این پلاسمید قرار گرفت تایید سازهی نوترکیب با استفاده از PCR کلونی با آغازگرهای مربوط به ژن و آغازگرهای مربوط به پلاسمید Phil-S1 تایید شد. در ادامه پس از انتقال ژن به مخمر، بیان ژن مورد بررسی قرار خواهد گرفت.